导读:本文包含了脐带间质干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:脐带间充质干细胞,博来霉素,中晚期肺纤维化,治疗作用
脐带间质干细胞论文文献综述
王成[1]（2018）在《脐带间充质干细胞治疗中晚期特发性肺间质纤维化的机理及机制探究》一文中研究指出目的:观察脐带间充质干细胞(MSCs)对中晚期肺间质纤维化的治疗价值。方法(1)临床部分:对1例系统性红斑狼疮(SLE)合并间质性肺炎的患者,在给予常规治疗的基础上给予MSCs治疗,观察患者临床表现,随诊胸部CT。(2)动物实验部分:将39只雄性昆明小鼠随机分为3组,分别为正常对照组(NC组)12只,博来霉素组(PC组)12只,脐带间充质干细胞治疗组(MSCs组)15只,第0天PC组及MSCs组小鼠气管内注入博来霉素(BLM),NC组小鼠气管内注入等量生理盐水,21天后随机取MSCs组3只小鼠解剖观察肺纤维化情况,同时MSCs组小鼠尾静脉注入MSCs,42天后同一处死小鼠,比较NC组与PC组及PC组与MSCs组小鼠的肺湿重、羟脯氨酸及转化生长因子-β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)等因子的表达情况,研究MSCs对博来霉素诱导的中晚期肺纤维化小鼠的干预作用。相关实验数据用SPSS19.0统计软件进行统计学处理。结果(1)临床部分:该患者有较严重的咳嗽、活动后憋喘等症状,胸部CT示双肺有明显的纤维条索形成,在给予常规治疗的基础上给予MSCs治疗后,症状及纤维条索消失。(2)动物实验部分:PC组及MSCs组小鼠较瘦弱,精神较差。NC组小鼠在气管内注入生理盐水后第4天死亡1只;PC组在气管内注入BLM后第3天和第4天内共死亡3只,在第35天及38天各死亡1只;MCS组同样在气管内注入BLM后第3天和第4天内共死亡3只。观察病理切片,21天MSCs组小鼠肺组织肺泡纹理紊乱,肺泡间隔增宽,光镜下可见肺纤维化形成;42天后NC组小鼠肺泡纹理清晰可见,无肺泡间隔增宽现象;PC组小鼠肺泡纹理紊乱,较难辨认,间隔明显增宽;MSCs组小鼠肺泡纹理较清晰,容易辨认,肺泡间隔增宽。肺湿重、TGF-β比较PC组明显高于NC组(P<0.01),PC组高于MSCs组(P<0.05);IFN-γ比较PC组明显高于NC组(P<0.01),MSCs组明显高于PC组(P<0.01)。结论:MSCs对间质性肺炎患者可能有一定的治疗作用;MSCs在小鼠中晚期肺间质纤维化中可以抑制小鼠肺组织中促纤维化细胞因子TGF-β、增强抑制纤维化细胞因子IFN-γ的表达,进而有效减轻小鼠肺组织中羟脯氨酸含量,减轻中晚期小鼠肺间质纤维化。(本文来源于《山东中医药大学》期刊2018-05-30）
李典,何大维,唐波,郭文浩,丹沈[2]（2018）在《人脐带间充质干细胞外泌体抑制草酸及草酸钙诱导的HK-2细胞上皮间质转化》一文中研究指出采用草酸及一水草酸钙(calcium oxalate monohydrate,COM)晶体诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)发生上皮间质转化,同时采用超速离心法提取人脐带间充质干细胞外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cells exosome,huc MSC-Ex)用于干预间质化的HK-2细胞,探究外泌体对其纤维化的缓解作用。采用Western blot、透射电镜及NTA(nanoparticle tracking analysis)鉴定外泌体表面标志物及形态,采用MTT法观察外泌体对细胞活性的影响;免疫荧光双标法检测ZO-1及N-cadherin的表达;Western blot检测细胞上皮标志物E-cadherin和ZO-1、间质标志物N-Cadherin和α-SMA及相关信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达水平。结果显示,草酸和COM晶体可使HK-2细胞形态发生上皮间质转化,并降低上皮细胞标志物E-cadherin和ZO-1的表达,同时使HK-2细胞高表达间质标志物N-Cadherin和α-SMA并上调信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达。电镜下可观察到huc MSC-Ex形态呈双层膜,中空,圆形或椭圆形,并且阳性表达外泌体标志物Alix、CD63和TSG101蛋白,其粒径分布在80~300 nm之间。huc MSC-Ex预处理可显着提高暴露于草酸及COM晶体的HK-2细胞活性。降低HK-2细胞中N-Cadherin和α-SMA及信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达,恢复其上皮标志物E-cadherin和ZO-1蛋白的表达。该研究结果表明,huc MSC-Ex能够缓解草酸及COM晶体诱导的HK-2细胞损伤,同时抑制其上皮间质转化。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年06期）
吴佩佩[3]（2018）在《人脐带间质干细胞来源外泌体在急性皮肤光损伤中的作用及机制》一文中研究指出目的:随着臭氧层空洞日益加剧,人们接触紫外线(UV)明显增多,长期接触过量UV易导致皮肤晒伤、光老化及肿瘤发生。据报道人脐带间质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hucMSC)条件培养基能保护UV损伤,延缓皮肤衰老。外泌体(exosome)是hucMSC旁分泌关键成分,大量存在其条件培养基中。然而,hucMSC-exosome(hucMSC-ex)对皮肤UV损伤作用未见报道,本文旨在探讨hucMSC-ex能否防治UV所致皮肤损伤及其作用机制。方法:组织贴壁法分离hucMSC,成脂和成骨诱导实验鉴定hucMSC分化潜能;30%蔗糖密度梯度超滤离心法分离hucMSC-ex,蛋白质印迹分析其表面标记,透射电镜观察其形态和大小,Nanosight检测其粒径分布和浓度;hucMSC-ex预处理暴露皮肤,UVA和UVB辐照法制作SD大鼠急性光损伤模型,大体观、HE和免疫组化等方法分析其防护效果;Western Blot检测组织蛋白PCNA、p-NF-κB和TNF-α表达,免疫组化和荧光检测组织8-OHDG和γH_2AX表达;共聚焦显微镜检测PKH-67标记hucMSC-ex被HaCaT细胞内化情况;UVB和H_2O_2建立HaCaT氧化损伤细胞模型,免疫荧光分析hucMSC-ex对活性氧自由基(ROS)表达影响;细胞免疫荧光检测PCNA和Caspase3表达量;Western Blot检测H_2O_2作用后HaCaT细胞增殖、凋亡、炎症情况,qRT-PCR分析HaCaT细胞SIRT1和TNF-α表达情况;Western Blot检测对照组和过表达14-3-3ζ组exosome中14-3-3ζ和SIRT1表达情况;过表达14-3-3ζexosome(ad-14-3-3ζ-ex)与H_2O_2共处理HaCaT细胞,免疫荧光、Western Blot和qRT-PCR检测SIRT1表达情况;应用过表达14-3-3ζ腺病毒转染HaCaT细胞,免疫荧光和Western Blot检测细胞SIRT1表达变化。结果:茜素油红O染色阳性;Exosome表达CD63和CD9,电镜下为“杯状”结构,Nanosight分析其直径在100nm左右;对照组皮肤光滑细腻、状态健康,而模型组皮肤明显红肿、脱屑、粗糙;HE显示对照组皮肤分层清晰,无病理变化,而模型组表皮细胞大片坏死,部分仍黏连,分层紊乱。真皮大量炎细胞浸润,网织纤维肿胀变性,而hucMSC-ex组表皮红肿、脱屑明显减轻,细胞坏死脱落明显减少,炎细胞浸润较少。DNA损伤产物显着减少,p-NF-κB水平显着下调,PCNA明显上调;hucMSC-ex在HaCaT胞质中富集,ROS和8-OHDG显着减少,Bax、p-NF-κB、TNF-α明显下调,PCNA、Bcl2显着上调;氧化应激条件下HaCaT细胞SIRT1表达呈时间和剂量依赖性下调,而hucMSC-ex处理组SIRT1则显着高表达;过表达14-3-3ζexosome(ad-14-3-3ζ-ex)显着上调HaCaT细胞SIRT1水平,促进自噬活化,减少DNA损伤和细胞凋亡;过表达14-3-3ζ腺病毒转染HaCaT细胞显着促进SIRT1表达。结论:HucMSC-ex携带14-3-3ζ促进HaCaT细胞SIRT1上调,减少ROS产生和DNA损伤,促进自噬活化发挥细胞保护作用,缓解UV和H_2O_2诱导的氧化损伤。(本文来源于《江苏大学》期刊2018-04-23）
王新龙[4]（2018）在《人脐带间质干细胞来源exosomes修复急性心肌梗死损伤机制研究》一文中研究指出目的:本实验室前期研究发现人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs)来源的exosomes(hucMSCs-exosomes)能够有效修复急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)心肌损伤,但其具体作用机制不明。本研究将在前期研究基础上进一步探讨hucMSCs-exosomes修复心肌损伤的潜在机制。方法:采取组织块贴壁培养法培养hucMSCs并收集培养上清;超滤结合蔗糖重水梯度密度离心法分离纯化hucMSCs-exosomes,并利用纳米颗粒分析仪和Western blot进行鉴定;在采用结扎冠状动脉左前降支法构建SD大鼠AMI模型基础上通过尾静脉输注hucMSCs-exosomes治疗2天和4周后,通过超声心动图、HE染色和Western blot检测hucMSCs-exosomes对心肌损伤的修复作用;体外构建H9C2(2-1)心肌细胞缺血缺氧损伤模型,乳酸脱氢酶(LDH)释放检测、台盼蓝染色和Western blot检测hucMSCs-exosomes对心肌损伤的修复作用;同时,Western blot检测hucMSCs-exosomes修复心肌损伤过程中Smad7的表达变化;利用生物信息学预测调节Smad7表达的miRNA,并通过定量PCR和双荧光素酶报告基因系统进行验证;将H9C2(2-1)心肌细胞转染miR-125b-5p mimics再缺血缺氧48h,通过Western blot检测Smad7、Bax和Bcl-2的表达以及LDH释放检测,分析exosomes修复心肌损伤的可能机制。结果:本研究成功分离hucMSCs及hucMSCs-exosomes,纳米颗粒分析显示hucMSCs-exosomes直径在134nm左右,最终浓度约为4.17±0.22×10~(10) particles/ml,表达CD9、CD63和CD81等exosomes相关蛋白标志物;体内hucMSCs-exosomes输注能够提高SD大鼠AMI模型心脏的收缩能力,改善心肌损伤;体外hucMSCs-exosomes能明显抑制H9C2(2-1)心肌细胞缺血缺氧损伤导致的细胞凋亡;并发现体内外心肌损伤后Smad7表达量明显下降,而hucMSCs-exosomes能上调损伤心肌细胞的Smad7表达;生物信息学预测结果表明miR-125b-5p调节Smad7的表达,使用miR-125b-5p mimics转染H9C2(2-1)心肌细胞再缺氧48h后,相比较于MNC+hypoxia组,miR-125b-5p mimics+hypoxia组的心肌细胞表达Smad7明显下调,并导致心肌细胞损伤更加明显,hucMSCs-exosomes在一定程度上缓解了这种现象。结论:HucMSCs-exosomes能够有效修复AMI心肌损伤,其可能的机制是hucMSCs-exosomes通过抑制miR-125b-5p上调Smad7表达促进心肌修复。(本文来源于《江苏大学》期刊2018-04-13）
骆峻,丁利军,周强,韩奕文,缪文玲[5]（2017）在《脐带间质干细胞来源外泌体的安全性评估》一文中研究指出目的评估脐带间质干细胞(huc-MSC)来源的外泌体作为一种临床应用生物制品的自身安全性。方法超速离心法分离外泌体,利用蛋白质印迹法(WB)检测外泌体表面标记CD9、CD63,利用纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测外泌体的大小及浓度。溶血试验、全身过敏性试验和血常规检测验证外泌体的自身安全性。结果外泌体表达外泌体特异性分子CD9、CD63,外泌体不会引起溶血、全身过敏反应及血常规异常。结论脐带间质干细胞来源的外泌体具有外泌体的一般特征,且具有一定的安全性,为外泌体今后在临床上的应用提供了实验依据。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2017年24期）
俞静,张荣雪,贾浩源,王娟娟,纪成[6]（2017）在《脐带间质干细胞来源的外泌体抑制TGF-β_1诱导的NRK-52E细胞上皮-间质转化》一文中研究指出目的:探讨脐带间质干细胞来源的外泌体(exosome from human umbilical mesenchymal stem cells,huc MSCex)对转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的NRK-52E细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其机制。方法:体外培养大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞,TGF-β_1诱导使其发生EMT作为诱导组,未经任何处理的NRK-52E细胞为对照组,TGF-β_1处理24 h后加入huc MSC-ex共培养48 h为干预组。倒置显微镜下观察各组细胞形态;蛋白质印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原α1链(Col1A1)和TGF-β_1等蛋白表达,qRT-PCR检测miR-199a表达。结果:TGF-β_1诱导24 h后,细胞由卵圆形变为长梭形,且细胞密度降低。给予huc MSC-ex干预后,细胞形态恢复。与对照组相比,诱导组E-钙黏蛋白表达降低,N-钙黏蛋白,α-SMA、Col1A1和TGF-β_1表达升高;干预组相关蛋白表达较诱导组发生逆转;诱导组中miR-199a表达下调,而huc MSC-ex干预组表达增加。结论:huc MSC-ex通过上调NRK-52E细胞miR199a表达逆转由TGF-β_1诱导的EMT作用。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2017年04期）
王娟娟,贾浩源,张斌,俞静,纪成[7]（2017）在《人脐带间质干细胞来源的外泌体对顺铂抗肿瘤疗效的影响》一文中研究指出目的:探讨人脐带间质干细胞来源的外泌体(exosome from human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSC-ex)对顺铂抗肿瘤效果的影响,评价hucMSC-ex的安全性。方法:蛋白质印迹法检测外泌体的表面特异性分子CD9、CD63以鉴定hucMSC-ex。通过细胞抑制率测定、克隆形成实验、细胞迁移实验,检测hucMSC-ex存在条件下顺铂对HGC-27细胞和MGC-803细胞抑制率、克隆形成及迁移效率的影响。结果:HucMSC-ex表达外泌体特异性分子标志物CD9、CD63;hucMSC-ex能减弱顺铂对HGC-27细胞和MGC-803细胞的生长抑制作用,但不影响顺铂作用后的HGC-27细胞和MGC-803细胞克隆形成及迁移效率。结论:hucMSC-ex对顺铂抗肿瘤疗效无明显影响,具有一定的安全性。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2017年03期）
俞静[8]（2017）在《人脐带间质干细胞外泌体对肾间质纤维化的修复及机制研究》一文中研究指出目的课题组前期研究已发现人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchy stem cell,huc MSC)及其分泌的外泌体(huc MSC-exosome)能缓解由顺铂诱导的急慢性肾损伤,micro RNA(mi RNA)在其中发挥重要作用。在此基础上,本课题建立了大鼠单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾间质纤维化模型和转化生长因子β1(TGF-β1)细胞诱导模型,通过体内外实验评价huc MSC-exosome缓解肾间质纤维化中的作用,并初步探讨其中的作用机制。方法体内实验分3组,假手术组:SD大鼠经左侧腹部切口打开腹腔寻到输尿管后缝合;UUO组:SD大鼠开腹进行单侧输尿管结扎;huc MSC-exosome干预组:SD大鼠单侧输尿管结扎24h后,经尾静脉注射huc MSC-exosome。小动物活体成像观察huc MSC-exosome在大鼠模型体内的分布。术后不同时间点(12h,24h,48h,72h,7d,14d)采集大鼠血清,检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;单侧输尿管结扎14d后处死大鼠,获取肾组织,HE染色观察不同组别的肾脏组织结构,Masson染色分析胶原沉积情况;免疫组织化学、免疫荧光、Western blot检测肾组织中上皮间质转化(epithelia-mesenchymal transition,EMT)相关分子,上皮钙黏着蛋白(E-cadherin,E-cad)、神经钙黏着蛋白(N-cadherin,N-cad)、赖氨酸氧化酶相关蛋白2(LOXL2)及纤维化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、α1-I型胶原(COL1A1)的表达水平。体外实验:大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)种植于6孔板上,细胞不做任何处理的为对照组。诱导组采用40ng剂量的TGF-β1诱导NRK-52E细胞24h使细胞发生EMT改变,干预组在TGF-β1诱导后加入huc MSC-exosome共培养48h。倒置显微镜观察各组别的细胞形态和细胞密度。Western blot检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、LOXL2及α-SMA、TGF-β1、COL1A1的表达,q RT-PCR检测各组NRK-52E细胞mi RNA(mi R-199a、mi R-146b)的表达。结果小动物活体成像结果显示经尾静脉注射的荧光标记huc MSCexosome大部分到达损伤左肾,右肾、脾脏、肺中略有存在,假手术组各脏器均没有荧光表达,显示huc MSC-exosome具有向损伤部位趋化的能力;huc MSC-exosome干预组中血清肌酐尿素氮较UUO组显着下降,提示肾脏功能有所恢复;HE染色结果表明huc MSC-exosome干预组较UUO组,肾小管扩张减缓,炎性细胞浸润减少,肾小管结构完整;Masson染色结果显示,huc MSC-exosome干预组肾间质中胶原沉积减少;与UUO组相比,huc MSC-exosome干预组E-cadherin表达增加,N-cadherin减少,提示间质上皮转化,α-SMA、TGF-β1、COL1A1等纤维化相关蛋白表达下降,表明huc MSC-exosome干预后肾间质纤维化改善。免疫荧光、免疫组化和Western blot检测EMT进程中关键蛋白LOXL2,发现UUO组LOXL2表达上调,而huc MSC-exosome干预后LOXL2表达下降。TGF-β1诱导NRK-52E细胞形态出现显着变化,由原来的光滑卵圆形变为不规则长梭形,细胞密度明显下降,E-cadherin表达下降,N-cadherin增加。Huc MSC-exosome干预后,Western blot检测显示E-cadherin表达增加,N-cadherin、α-SMA、COL1A1、TGF-β1下调,EMT进程得到缓解。q RT-PCR检测叁组细胞mi R-199a表达发现,TGF-β1诱导后mi R-199a表达低于对照组,而huc MSC-exosome干预后mi R-199a较诱导组含量明显增加,分析后具有统计学意义。制与LOXL2蛋白和huc MSC-exosome中包裹的mi RNAs有关。结论huc MSC-exosome在体内外均可逆转纤维化并缓解EMT,其作用机制与LOXL2蛋白和hucMSC-exosome中包裹的mi RNAs有关。(本文来源于《江苏大学》期刊2017-04-27）
江文倩[9]（2017）在《人脐带间质干细胞来源的exosome下调LOXL2缓解小鼠肝纤维化的作用机制研究》一文中研究指出目的肝纤维化是肝硬化的必经中间环节,其主要病理过程是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化为肌成纤维细胞、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过量沉积及肝组织结构破坏。前期研究已表明人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,huc MSC)来源的exosome(huc MSC derived-exosome,huc MSC-Ex)可缓解小鼠肝纤维化,但其具体机制仍不清楚。本研究在此基础上,进一步探讨huc MSC-Ex抗纤维化的作用机制。方法分离培养huc MSC,蔗糖/重水超速离心法提取huc MSC-Ex,透射电镜观察huc MSC-Ex形态,Nano Sight纳米颗粒跟踪分析仪检测huc MSC-Ex直径分布,Western blot检测huc MSC-Ex表面标志物CD9、CD63。体内注射四氯化碳(carbontetrachloride,CCl4)建立BALB/c小鼠肝纤维化模型,并应用huc MSC-Ex进行治疗,分组如下:PBS组(n=10),huc MSC-Ex组(n=10);动物活体成像检测huc MSC-Ex在小鼠体内分布,通过肝脏大体观、H&E染色、Masson染色等技术观察肝纤维化组织结构及胶原沉积,免疫组化和Western blot检测赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase-like 2,LOXL2)、HSC活化指标成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast Activation Protein,FAP)及α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)的表达。体外诱导肝星状细胞(LX-2)细胞活化,与huc MSC-Ex共培养,RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测LOXL2、一型胶原(collagenⅠ,COL1)及FAP表达。免疫组化及Western blot检测肝组织及LX-2细胞中Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)表达;利用重组腺病毒或质粒过表达或敲除YAP,Western blot检测LOXL2蛋白表达;荧光素酶报告基因检测YAP对LOXL2的转录活性,分析YAP对LOXL2的转录调控作用。Western blot检测huc MSC-Ex中14-3-3ζ表达;利用重组腺病毒转染huc MSC过表达14-3-3ζ,收集提取并鉴定14-3-3ζ过表达exosome(Ad-14-3-3ζ-Ex);Ad-14-3-3ζ-Ex及对照组exosome(Ad-GFP-Ex)与活化的LX-2细胞共培养,Western blot、免疫荧光检测LX-2细胞14-3-3ζ、YAP表达,分析14-3-3ζ与YAP核定位的相关性。结果Huc MSC-Ex呈球形膜性囊状结构,直径30~100nm左右,表达CD9、CD63等exosome表面标志物。动物活体成像显示荧光染料标记的huc MSC-Ex主要集中于肝纤维化小鼠肝脏组织,并且在huc MSC-Ex处理的肝脏中检测到exosome标志物CD63表达。与PBS组相比,huc MSC-Ex组小鼠肝纤维化减轻,肝组织中坏死结构减少,胶原沉积减弱,同时LOXL2表达下调、HSC活化指标FAP及α-SMA表达降低;huc MSC-Ex与诱导活化的LX-2细胞共培养后,LOXL2、COL1及FAP表达下降。在肝纤维化小鼠肝脏及活化的LX-2细胞中YAP核定位及LOXL2表达相关;在293T、LX-2、HL7702细胞中过表达YAP导致LOXL2蛋白表达增加,敲减YAP后,LOXL2蛋白表达下降;荧光素酶报告基因检测表明YAP对LOXL2具有转录调控作用。在活化的LX-2细胞中,Ad-14-3-3ζ-Ex具有比Ad-GFP-Ex更强的LOXL2表达抑制及YAP核定位抑制作用。结论HucMSC-Ex通过下调LOXL2表达抑制HSC的活化,缓解肝纤维化,其机制可能通过转运14-3-3ζ抑制YAP核定位相关。(本文来源于《江苏大学》期刊2017-04-26）
史惠[10]（2017）在《3,3'二吲哚甲烷预处理人脐带间质干细胞在皮肤烫伤中的作用及机制》一文中研究指出目的:皮肤烫伤破坏皮肤屏障功能,给患者带来触觉痛觉等障碍,且皮肤烫伤现有治疗方法效率不高,加速创面愈合至关重要。以间质干细胞为主的细胞治疗被广泛报道,利用小分子药物预处理间质干细胞可提高其在损伤修复中的治疗效率,加速损伤组织愈合。本文旨在研究小分子药物3,3'-二吲哚甲烷(3,3'-diindolylmethane,DIM )对人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hucMSC)预处理后的作用,以期在皮肤烫伤中发挥更好治疗效果,并阐明DIM预处理hucMSC的分子机制。方法:MTT试验确定DIM作用的浓度和时间。体内构建SD大鼠深II度烫伤模型,以PBS和hucMSC为对照,观察DIM改造后hucMSC的治疗效果。创面大体照片,HE染色及组织学评分用以评价皮肤表皮再生及毛囊等附属结构再生情况。免疫组织化学染色检测损伤部位增殖细胞核抗原PCNA,免疫荧光染色检测角蛋白CK19表达,荧光定量PCR检测I型/III型胶原比值,免疫组化检测皮肤组织β-catenin表达。体外探寻DIM对hucMSC预处理作用时,运用荧光定量PCR和Western blot检测hucMSC干性转录因子Oct4, Sox2, Nanog,Sall4表达情况。平板克隆检测hucMSC自我增殖能力,成脂诱导试验及成骨诱导试验检测hucMSC诱导分化潜能,定量PCR检测脂联蛋白adiponectin及碱性磷酸酶ALP表达,蛋白液相芯片技术检测hucMSC在DIM作用后旁分泌水平的改变。在研究DIM通过何种机制改造hucMSC时,采用荧光素酶报告基因检测Wnt信号通路的活化情况,免疫荧光及高内涵分析β-catenin的表达和入核情况。Westen blot检测β-catenin及其下游基因CyclinD3, CD44蛋白表达水平。使用β-catenin信号通路抑制剂ICG001进一步验证Wnt/β-catenin信号通路的作用,免疫荧光验证抑制剂抑制效果。平板克隆试验,成脂成骨诱导试验检测ICG001阻断β-catenin后,hucMSC自我增殖和多向分化的能力的改变。在进一步寻找关键Wnt分子时,荧光定量PCR筛选DIM作用后hucMSC中改变最为明显的Wnt分子。借助慢病毒载体干扰Wnt11基因的表达,定量PCR和Western blot验证慢病毒敲减效率。平板克隆,成脂成骨诱导试验检测Wnt11敲减后hucMSC自我增殖和多向分化能力的改变,并在体内模型中进一步验证。为了寻找Wnt11的有效传递形式,我们收集DIM处理过hucMSC的条件培养基,ELISA检测其中Wnt11分泌情况。用蔗糖密度梯度超速离心法提取上清中exosome。Westerrn blot检测exosome表面标记物CD9,CD63,CD81,Nanosight分析对提取的exosome直径、分布、颗粒及表面标记进行鉴定。同时留取匹配的去exosome上清,ELISA检测exosome及去exosome上清中Wnt11表达情况。将不同处理的exosome和去exosome上清作用于皮肤细胞,检测皮肤细胞增殖和迁移能力的改变。结果: MTT结果显示hucMSC较肿瘤细胞对DIM显示出更强的耐受性,DIM IC50为158.11μM,我们选取既不损伤细胞活性又具有最强效应的浓度和时间,即50μM DIM 作用 hucMSC 48 小时。DIM 预处理后的 hucMSC (DIM-hucMSC)在体内明显加速大鼠深Ⅱ度烫伤修复,大体创面结痂脱落,表皮再生化完成,毛囊等附属结构增殖活跃,炎性浸润显着降低,组织学评分及治疗效率高于hucMSC治疗组。免疫组化检测结果显示DIM-hucMSC治疗组,损伤部位皮肤细胞增殖活跃。CK19表达及Ⅰ/Ⅲ型胶原表达比值均上调。免疫组化检测损伤组织中β-catenin的表达,DIM-hucMSC组也明显升高。体外检测DIM对hucMSC预处理作用,能明显上调其干性转录因子Oct4,Sox2,Nanog,Sall4的mRNA和蛋白表达水平,增强其核内表达。平板克隆和成脂、成骨诱导试验显示DIM-hucMSC较hucMSC呈现出更强的自我增殖和多向分化的诱导潜能,Adiβonectin和ALP表达水平佐证了这一结果。蛋白液相芯片结果显示DIM-hucMSC旁分泌水平上调。荧光素酶报告基因检测显示DIM-hucMSC中Wnt信号活性增强,β-catenin表达上调且入核增加,转录稳定性提高。β-catenin信号通路抑制逆转了 DIM-hucMSC中干性上调和旁分泌能力增强的作用,并在体内抑制了 DIM-hucMSC的修复作用。慢病毒载体干扰Wnt11基因表达,Wnt11的干扰体外抑制了 DIM-hucMSC中β-catenin的活化,体内削弱了 DIM-hucMSC在烫伤组织中的治疗作用。收取DIM-hucMSC上清,发现上清同样具有上调hucMSC干性的作用。ELISA检测DIM-hucMSC上清中Wnt11分泌量增加,且去exosome上清中Wnt11表达含量较低。Exosome对Wnt11分子有效富集并成为其在细胞间传递,发挥生物学功能的主要活性形式。结论: DIM促进hucMSC中Wnt11蛋白的自分泌,活化自身Wnt/β-catenin信号通路,上调hucMSC自我增殖,多向分化和旁分泌水平,提高其在大鼠深Ⅱ度烫伤修复中的修复效率,为干细胞及干细胞成分治疗提供了新的方法和实验依据。(本文来源于《江苏大学》期刊2017-04-01）
脐带间质干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
采用草酸及一水草酸钙(calcium oxalate monohydrate,COM)晶体诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)发生上皮间质转化,同时采用超速离心法提取人脐带间充质干细胞外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cells exosome,huc MSC-Ex)用于干预间质化的HK-2细胞,探究外泌体对其纤维化的缓解作用。采用Western blot、透射电镜及NTA(nanoparticle tracking analysis)鉴定外泌体表面标志物及形态,采用MTT法观察外泌体对细胞活性的影响;免疫荧光双标法检测ZO-1及N-cadherin的表达;Western blot检测细胞上皮标志物E-cadherin和ZO-1、间质标志物N-Cadherin和α-SMA及相关信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达水平。结果显示,草酸和COM晶体可使HK-2细胞形态发生上皮间质转化,并降低上皮细胞标志物E-cadherin和ZO-1的表达,同时使HK-2细胞高表达间质标志物N-Cadherin和α-SMA并上调信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达。电镜下可观察到huc MSC-Ex形态呈双层膜,中空,圆形或椭圆形,并且阳性表达外泌体标志物Alix、CD63和TSG101蛋白,其粒径分布在80~300 nm之间。huc MSC-Ex预处理可显着提高暴露于草酸及COM晶体的HK-2细胞活性。降低HK-2细胞中N-Cadherin和α-SMA及信号通路蛋白TGF-β和Smad2的表达,恢复其上皮标志物E-cadherin和ZO-1蛋白的表达。该研究结果表明,huc MSC-Ex能够缓解草酸及COM晶体诱导的HK-2细胞损伤,同时抑制其上皮间质转化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脐带间质干细胞论文参考文献
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