李慧娥1贾恩厚2（通信作者）
（1包头医学院研究生在读内蒙古包头014040）
（2包头市疾病预防控制中心内蒙古包头014030）
【摘要】布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病，又称地中海弛张热，马耳他热，波浪热或波状热，俗称“懒汉病”，是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种人畜共患传染病。布病在我国绝大多数省(市、区)都有不同程度的发生和流行，尤其以北方16个省(市、区)为重。病畜和带菌动物是主要传染源，并且布鲁氏菌能感染多种宿主，具有高度传染性[1]，其中羊种布鲁氏菌对人有高度的致病性。在我国,布鲁氏菌病流行广泛,尤其是以畜牧业生产为主的地区，人群分布以农民和牧民为主。近年来，实时荧光定量PCR方法是应用较为普遍的一种快速检测方法，并能在非常短的时间内提供结果。布鲁氏菌病的流行不仅造成巨大的经济损失，而且严重威胁人群的健康，研究布鲁氏菌病的病原学、流行病学及其实时荧光定量PCR的重要性日益突出，已经成为我国公共卫生迫切需要解决的一个问题。
【关键词】病原学；流行特征；实时荧光定量PCR
【中图分类号】R3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）05-0034-03
Brucellosisetiology,epidemiccharacteristicsandresearchprogressoffluorescencequantitativePCRLiHuie.InnerMongoliaBaotouMedicalCollege,Baotou014040,China;JiaEnhou.InnerMongoliaBaotouCityCenterforDiseaseControlandPrevention,Baotou014030,China
【Abstract】Brucellosisinourcountry,thevastmajorityoftheprovince(city,area)hasadifferentdegreeofoccurrenceandpopular,especiallyin16provinces(cities,districts)inthenorth.Patientandsodoestheanimalisthemainsourceofinfectionandbrucellacaninfectavarietyofhost,allarehighlycontagious,onekindofbrucellasheephavehighlypathogenictoman.Real-timefluorescentquantitativePCRmethodiscommonarapiddetectionmethod,canprovideyouwiththeresultsinaveryshortperiodoftime.Brucellosisepidemicnotonlycausehugeeconomiclosses,butalsoaseriousthreattopeople'shealth,studyofbrucellosisetiology,epidemiology,real-timefluorescentquantitativePCRandtheimportanceoftheincreasinglyprominent,hasbecomeourcountrypublichealthisanurgentneedtosolveaproblem.
【Keywords】Etiology;Popularcharacteristic;Real-timefluorescentquantitativePCR
布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)是由布鲁氏菌引起的传染-变态反应性的人畜共患性全身慢性传染病,布病通常在自然界的动物间传播，并不依赖人类而存在，具有典型的自然疫源性。在世界200多个国家中，有170多个国家和地区有人、畜间布病的存在和流行[2]。目前,没有安全有效的布鲁氏菌疫苗可用于人类[3]。近几年,随着畜牧业和旅游业的快速发展,布病疫情呈现逐年上升的趋势[4]。牲畜感染布病后，不仅影响优良品种的改良和阻碍畜牧业发展，而且人类感染布病后，常因误诊而转为慢性，导致反复发作长期不愈而影响身体健康。
1.布鲁氏菌病病原学特征
1.1致病原
1970年联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)布鲁氏菌病专家委员会把布鲁氏菌分成6个种19个生物型，牛种布鲁氏菌(B.abortus)有8种生物型（生物型1～7、9），猪种布鲁氏菌(B.suis)有5种生物型（生物型1～5），羊种布鲁氏菌/马尔他布氏杆菌(B.melitensis)有3种生物型（1～3型），绵羊附睾布鲁氏菌(B.ovis)和犬种布鲁氏菌(B.canis)以及沙林鼠布鲁氏菌(B.neotomae)各1个型。在这6种布鲁氏菌中，可感染人群的主要布鲁氏菌为羊、牛、猪3种16型。这些布鲁氏菌不存在质粒、荚膜及鞭毛，以气溶胶的方式通过皮肤黏膜及眼结膜接触进入机体，寄生于单核巨噬细胞内破坏人体的免疫系统[5]。20世纪90年代，人们陆续从海豚、海豹、水獭及鲸鱼中分离到布氏菌，后经证实海洋种布鲁氏菌也可以传染给人类[6]。沙林鼠布鲁氏菌和田鼠型布鲁氏菌的自然宿主以及是否可以感染人类发病都是未知的[7]。
1.2形态与染色特性
布鲁氏菌的大小为(0.5～0.7)×(0.6～1.5)μL，是一种无鞭毛不能运动、无芽胞，有荚膜，不形成孢子,毒力菌株有菲薄的荚膜,包括光滑型和粗糙型(脂多糖上缺少O链)的革兰氏阴性短棒状杆菌。布鲁氏菌可被所有的碱性染料着色，革兰染色阴性，吉姆萨染色呈紫红色。科兹洛夫斯基提出用0.5%沙黄溶液进行染色，加热至出现气泡，水洗后用0.5%孔雀绿或1%亚甲兰水溶液复染1分钟，布鲁氏菌染成红色，其他细菌染成绿色或蓝色[5]。
1.3抵抗力
布鲁氏菌一般不易在外界环境消亡，布鲁氏菌对低温和干燥都有很强的抵抗力，在土壤、水、粪、尿、畜舍、皮毛中可生存数天至4～5个月;在水中可存活四个月;酸奶中存活不到一个星期[8]。在污染的衣服、土壤、排泻物及死畜脏器、尘埃以及病畜分泌物中能存活1～4个月;在冷冻肉中可以生存3个月左右;在鲜牛乳中甚至长达18个月;在食品中可生存2个月以上;在山羊奶酪中可以存活三个星期;在衣服、皮毛上可以生存5个月之久。但对热敏感（湿热如100℃，0.5min;干热100℃，7min60℃,30min或阳光直射1～4h可死亡，电离辐射、巴氏灭菌均可杀死该菌)，布鲁氏菌对一般消毒剂比较敏感在几小时内即可杀死该菌，对2%的来苏水、2%福尔马林、0.2%的漂白粉、5%的石灰水、甲醛、次氯酸盐、碘伏等，作用15min可将其快速杀死;0.1％新洁尔灭30s、0.2％～2.5％漂白粉2min即可灭活，在抗生素中，其对青霉素不敏感，对氯霉素、链霉素、四环素、庆大霉素、强力霉素、卡那霉等敏感[9]。
2.流行病学特征
2.1季节性
羊种布鲁氏菌病主要是在春季流行开始，夏季达到高峰，秋季流行处于下降趋势；牛种布鲁氏菌病夏秋季节的发病率较高[10]。总是在羊产羔季节之后的2～3个月左右，即4～6月。夏季剪羊毛和奶食多，也会出现小的发病高峰。
2.2年龄、性别分布
人感染率与性别无关，感染率高低主要取决于接触机会。由于布病相关职业中工作者多为男性，所以，男性病例较为多见，但从大规模流行病学调查分析，年龄和性别在本病流行病学上无特殊意义[11]。
2.3职业分布
凡与病畜、染菌畜产品接触多者发病率即高，农民、牧民、屠宰工、兽医、制革工和肉食品加工者等高危人群高于一般人群，主要通过接触流产物、精液和乳汁排菌，出现职业聚集可能与羊类等牲畜密度及肉类加工业发达有关，人们在聚集区内多从事放牧、屠宰、售卖羊类等畜产品加工行业等接触患病牲畜的机会大，同时由于防护意识缺失及防护措施落后，从而使该地区发病较多[12]。孙丽媛等报道[13]从事山羊贩卖屠宰的患者临床表现比较典型,病情较重,而肉食品加工、销售感染后不出现临床表现,以隐性感染为主[14]，这可能与不同种型的布氏菌毒力差异有关。
3.实时荧光定量PCR
我国对该病诊断的国家标准主要是细菌学和血清学检测，但均需多个步骤完成，特异度和灵敏度低，检测结果的判定存在主观性，致使结果缺乏统一性[15]，基于分子生物学的方法则能弥补这些方法的不足,近年来，实时荧光定量PCR方法是应用较为普遍的一种快速检测方法，是目前确定样品中DNA拷贝数最敏感、最准确的方法。可在物种和生物型水平上进行布鲁氏菌鉴定。
随着分子生物学技术的发展,实时荧光定量PCR建立了一系列标记技术。具体包括2大类,即探针类和染料类。比较常用的是TaqMan系列的水解探针。TaqMan系列的水解探针包括TaqManTM、TaqManMGB、TaqMan-MB等。TaqManMGB探针是在TaqMan探针的基础上加以改进,长度缩短到13bp,在探针3'端增加了MGB(minorgroovebinder)分子，这种探针具有淬灭的效果好、无背景荧光、荧光标记灵活的优点。高正琴等报告[16]TaqManMGB探针实时荧光定量PCR能够准确地从布鲁氏菌阳性样本中检测到布鲁氏菌DNA，最低能够检测到的布鲁氏菌数量为9.3拷贝，比常规PCR方法的灵敏度高100倍,检测时间仅为2h，该技术适用于传染性病原体的快速检测与鉴定。何洪彬等[17]采用全玻璃液体冲击式采样器，收集布鲁氏菌气溶胶，采用SYBRGreenI实时荧光定量PCR进行定量分析。该技术具有敏感性高、特异性强，重复性好等优点;此外操作简便、价格低廉、结果直观，在临床检测和对疾病进程的研究上具有很高的实用价值。
综上所述,布病的危害十分严重,不仅造成畜牧业、养殖业的巨大损失，而且威胁着人类生命健康。随着分子生物学的发展，实时荧光定量PCR对于早期诊断和控制布病疫情具有很好的应用前景,建立快速、准确、可靠、便捷诊断方法对布鲁氏菌病的防控起着至关重要的作用。
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