导读:本文包含了脑膜纤维化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蛛网膜下腔出血,TGF-β1,PICP,柔脑膜
脑膜纤维化论文文献综述
王大巍,徐德会,周光勇,何士伟[1]（2019）在《大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜纤维化及其相关指标的研究》一文中研究指出目的:通过研究大鼠蛛网膜下腔出血后脑脊液中TGF-β1和PICP浓度的变化,探求其与柔脑膜纤维化的关系;方法:通过二次注血法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型,分成SAH组,NS组,空白组,在第3,7,14,21天应用双抗体夹心ELISA法检测大鼠脑脊液中TGF-β1浓度的变化,应用放射免疫法检测大鼠脑脊液中PICP浓度的变化,并检测第21天各组大鼠柔脑膜纤维化程度;结果:在各个时间点,SAH组脑脊液中TGF-β1浓度均高于生理盐水组及空白组,并具有显着差异性。SAH组脑脊液中的TGF-β1浓度的变化呈现双时相;造模第3天SAH组脑脊液中PICP浓度与生理盐水组无显着差异性,第7天两组有显着差异性(P<0.05),第14天,第21天两组间有显着差异性(P<0.01),SAH组PICP浓度从第3天开始升高,第14天达到高峰后下降;结论:①枕大池两次注血法可成功制作SAH动物模型,②蛛网膜下腔出血后脑脊液中TGF-β1,PICP浓度升高可作为衡量SAH后柔脑膜纤维化的指标。(本文来源于《名医》期刊2019年06期）
岳学静[2]（2016）在《TGF-β1诱导RMMCs脑膜纤维化信号通路的研究》一文中研究指出背景:脑积水(external hydrocephalus,EH)是临床常见颅脑疾病,严重影响到患者生活质量,成为沉重的家庭与社会负担。脑积水一旦形成,致残率很高。目前脑积水的临床治疗手段大多仅能缓解症状,并不能彻底治愈,因此,脑积水的治疗是神经病学科的一大难题。各种类型脑积水的共同原因是蛛网膜下腔纤维增生,粘连,软脑膜纤维化是其主要病理改变,主要表现为脑膜间皮细胞(meningeal mesothelial cells,MMCs)大量增殖以及细胞外基质的堆积。原代脑膜间皮细胞分离困难,体外培养要求条件较高,传代难度大,传多代后细胞贴壁率大幅下降,这些缺陷给体外研究带来困难,成为阻碍脑膜间皮细胞相关研究的重要技术难题。因此,体外培养脑膜间皮细胞并建立永生化细胞系可为脑膜相关疾病的研究提供方便可靠的细胞模型,对于了解脑膜间皮细胞在脑膜纤维化中的作用和功能意义重大。同时,有关脑膜纤维化的研究大多局限于影像学和组织学层面,对其分子水平的发病机制研究甚少。引起器官纤维化的细胞因子众多,近年来研究较广泛、深入的是TGF-β1(transforming growth factor-beta 1,转化生长因子-β1)。有研究结果证实,TGF-β1可引起脑膜间皮细胞CTGF(connective growth factor,结缔组织生长因子)的m RNA和蛋白表达上调,促使脑膜间皮细胞增殖并合成多种胶原等细胞外基质,导致脑膜纤维化的形成,因此阻断TGF-β1通路对抑制脑膜纤维化具有重要意义。但因TGF-β1还具有免疫调节和抑制炎性反应等重要生理功能,使直接阻断TGF-β1的治疗缺乏临床可行性,故应找寻TGF-β1下游新的治疗靶点以单纯阻断TGF-β1促纤维化的过程。p38 MAPK(p38 mitogen-activated protein kinase,p38丝裂原活化蛋白激酶)和ERK/MAPK通路(mitogen-activated protein kinases,MAPKs,丝裂原活化蛋白激酶;extracellular signal-regulated kinase,ERK,细胞外信号调节激酶)是信号转导的两条重要通路,有学者证明在多种细胞,如肺成纤维细胞,肾系膜细胞及肾成纤维细胞中p38信号通路和ERK/MAPK都可介导TGF-β1诱发的纤维化,但是两者是否参与TGF-β1对脑膜间皮细胞纤维化的诱导并不清楚。本课题尝试建立大鼠脑膜间皮细胞永生化细胞系并以外源TGF-β1为刺激因子建立体外脑膜纤维化的细胞模型,从基因转录和蛋白合成两个方面探讨p38MAPK和ERK/MAPK信号通路在TGF-β1诱导脑膜间皮细胞纤维化的具体作用,试图为脑积水的防治寻到有效的干预位点。目的:1.建立大鼠脑膜间皮细胞永生化细胞系。2.以TGF-β1为刺激因子建立体外脑膜纤维化的细胞模型,观察RMMCs中有无参与组织纤维化的p38 MAPK及ERK/MAPK的表达,并应用p38MAPK特异性抑制剂SB203580、ERK/MAPK的抑制剂U0126处理细胞,观察CTGF的表达,探讨脑膜纤维化的发生机制,为今后防治脑膜纤维化寻求有效的靶点。方法:1.大鼠原代脑膜间皮细胞的分离和培养:用胰酶消化组织块法收集大鼠原代脑膜间皮细胞;2.构建表达SV40LT的慢病毒载体并转染大鼠脑膜间皮细胞;3.应用扫描电镜、细胞免疫荧光化学、RT-PCR等技术从细胞形态、特异性标志物、目的基因的表达等方面对野生及转染SV40LT后的大鼠脑膜间皮细胞进行鉴定。4.用不同浓度的TGF-β1分别孵育培养RMMCs 24 h,采用q PCR测定CTGF的相对表达量,采用Western blotting测定p-p38MAPK、p-ERK1/2的信号强度;预先用不同浓度的SB203580或U0126处理RMMCs,观察TGF-β1诱导的CTGF表达是否受影响。采用q PCR测定CTGF m RNA的相对表达量,采用Western blotting测定CTGF蛋白质表达水平。结果:1.体外成功培养大鼠原代脑膜间皮细胞。分离培养的RMMCs在倒置显微镜下观察:细胞为多边形,汇合时呈铺路石样排列;扫描电镜下可见细胞表面有大量密集突起的绒毛;免疫细胞化学鉴定结果显示RMMCs抗波形蛋白抗原阳性,抗细胞角蛋白抗原阳性,抗第VIII因子相关抗原阴性,流式细胞术检测培养细胞的纯度达90%以上。2.构建含SV40LT基因的慢病毒表达载体,并成功转染RMMCs。转染后挑选单克隆RMMCs鉴定,扫描电镜下可见细胞表面有大量密集突起的绒毛;免疫细胞化学鉴定结果显示抗波形蛋白抗原阳性,抗细胞角蛋白抗原阳性,抗第VIII因子相关抗原阴性;RT-PCR鉴定目的基因SV40LT成功整合入RMMCs基因组。3.TGF-β1可诱导体外RMMC细胞发生纤维化,表现为纤维化标志物CTGF表达水平的显着增加;4.TGF-β1以浓度依赖的方式诱导脑膜间皮细胞中p38 MAPK通路的活化,SB203580可阻断TGF-β1对该信号通路的活化,并强烈抑制纤维化标记物CTGF的表达。SB203580预处理细胞后,再应用TGF-β1刺激,CTGF的诱导表达几乎被完全抑制。5.TGF-β1以浓度依赖的方式诱导脑膜间皮细胞中ERK/MAPK通路的活化。U0126可阻断TGF-β1对该信号通路的活化,但纤维化标志物CTGF的诱导表达不受影响。结论:1.经SV40LT的慢病毒载体成功建立RMMCs永生化细胞系。2.TGF-β1可通过激活p38 MAPK通路促进体外培养的脑膜间皮细胞CTGF表达。TGF-β1活化p38 MAPK通路促进CTGF表达是其致脑膜纤维化的重要机制之一。3.TGF-β1可以诱导细胞中ERK/MAPK通路的活化,但ERK/MAPK通路不参与TGF-β1致脑膜纤维化的过程。4.TGF-β1可通过多种途径促进体外培养的脑膜间皮细胞CTGF表达。(本文来源于《郑州大学》期刊2016-05-01）
孟桃,夏坤伟,康婕,陶涛,李小刚[3]（2015）在《Wnt/β-catenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜纤维化中的作用》一文中研究指出目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜纤维化中的作用。方法 1.采用"二次枕大池注血法"建立大鼠蛛网膜下腔出血模型。2.将75只健康雄性SD大鼠随机分为叁组:空白组、假手术组、模型组。各组按时间点分为术后3d、6d、10d、14d和21d,5个亚组,每个亚组5只大鼠。3.于术后1、3、6、10、14、21d对各组大鼠进行行为(本文来源于《中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（上）》期刊2015-09-18）
康婕,陶涛,李作孝,李小刚[4]（2015）在《Wnt信号通路对大鼠脑室出血后柔脑膜纤维化的影响》一文中研究指出目的本课题通过检测脑脊液PICP浓度,脑组织Wnt3a蛋白表达,探讨Wnt信号通路在大鼠脑室出血后柔脑膜纤维化中的作用。方法 1.运用脑立体定位仪,建立大鼠IVH模型。2.清洁级雄性SD大鼠75只,体重180g~200g,随机分为脑室出血组(IVH组)(n=25),假手术组(n=25),正常对照组(n=25)。各组分为3d、6d、10d、14d、21d(本文来源于《中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（上）》期刊2015-09-18）
成利[5]（2015）在《MiR-29c在大鼠蛛网膜下腔出血后抑制柔脑膜纤维化的实验研究》一文中研究指出背景蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)是第叁位急性脑血管事件,其发生率仅次于脑梗死和脑出血。慢性交通性脑积水是蛛网膜下腔出血后常见并发症之一,文献报道发生率在8%～67%,可严重影响患者预后。目前认为,柔脑膜纤维化是蛛网膜下腔出血后慢性交通性脑积水发生的主要原因。microRNA是一类长度约18～25个核苷酸的内源性非编码调控单链小RNA分子,主要功能是通过结合靶基因mRNA,抑制靶基因转录或促使靶基因降解,从而抑制基因表达。miR-29家族成员包括miR-29a、miR-29b-1、miR-29b-2、 miR-29c。除参与肿瘤生长、细胞衰老及分化过程外,抑制组织器官纤维化是目前文献报道miR-29家族主要功能。在肝脏、肾脏、心脏、肺等组织器官纤维化过程中,miR-29家族表达均下调。本课题组前期研究发现,实验性蛛网膜下腔出血大鼠柔脑膜中miR-29c表达亦存在下调,miR-29a、miR-29 b表达无统计学意义。本实验拟利用慢病毒感染的方式使miR-29c过表达,观察miR-29c对柔脑膜纤维化的影响。目的通过观察高表达miR-29c后实验性蛛网膜下腔出血大鼠柔脑膜内胶原蛋白及脑脊液中PICP的表达情况,探讨miR-29c在蛛网膜下腔出血(SAH)后柔脑膜纤维化过程中的作用。方法选用(300±20)g健康雄性SD大鼠26只按随机数字表法分为假手术组(6只)、空白慢病毒组(8只)、LV-rno-miRNA-29c组(12只)。侧脑室内分别注入5μL生理盐水、5μL空白慢病毒、5 μ L LV-rno-miRNA-29c。注射1周后,通过枕大池二次注血法建立蛛网膜下腔出血模型。造模21d后处死大鼠,采集大鼠柔脑膜及脑脊液标本,采用Realtime PCR法检测柔脑膜内转化生长因子β1(TGF-β1)及miR-29c表达量,酶联免疫吸附法(Elisa)检测脑脊液(CSF)中Ⅰ型胶原前端肽(procollagen I C-Terminal propeptide, PICP)含量,柔脑膜Masson染色观察柔脑膜胶原纤维。结果1. Realtime PCR检测发现,空白慢病毒组柔脑膜中TGF-β1mRNA表达显着高于假手术组(0.0209±0.0018VS0.0025±0.0008,P<0.05),miR-29c呈表达下调(0.0148±0.0054 VS 0.0177±0.0031,P<0.05)。2.酶联免疫吸附法检测发现,LV-rno-miRNA-29c组脑脊液中PICP表达低于空白慢病毒组[(181.79±14.34)VS(255.16±20.10),P<0.01] ug/L。3.柔脑膜Masson染色发现,高表达miR-29c后纤维化指标较空白慢病毒组显着减小(77.64±6.43 vs 108.29±7.69,P<0.01)。结论1.SAH模型大鼠柔脑膜内TGF-β1表达升高,miR-29c表达降低。2. LV-rno-miRNA-29c组大鼠慢病毒成功高表达柔脑膜内miR-29c。3.维持miR-29c高表达可抑制SAH后柔脑膜内胶原合成及脑脊液内PICP释放,从而减少细胞外基质形成,有效控制柔脑膜纤维化的形成。(本文来源于《山东大学》期刊2015-05-10）
成利,张传斌,李猛,张玉震,孙金龙[6]（2015）在《MiR-29c在大鼠蛛网膜下腔出血后抑制柔脑膜纤维化的实验研究》一文中研究指出目的探讨miR-29c在蛛网膜下腔出血(SAH)后柔脑膜纤维化过程中的作用。方法选用健康雄性SD大鼠26只按随机数字表法分为假手术组(6只)、空白慢病毒组(8只)、LV-rno-miRNA-29c组(12只)。侧脑室分别注入5μL生理盐水、空白慢病毒、LV-rno-miRNA-29c,注射1周后,通过枕大池二次注血法建立蛛网膜下腔出血模型。造模21 d后处死大鼠,采用Realtime PCR法检测柔脑膜内转化生长因子β1(TGF-β1)及miR-29c表达量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑脊液(CSF)中Ⅰ型胶原前端肽(PICP)含量,柔脑膜Masson染色观察柔脑膜胶原纤维。结果 SAH后柔脑膜中TGF-β1表达升高,miR-29c表达下调;上调miR-29c能显着抑制脑脊液中PICP及柔脑膜中胶原表达。结论维持miR-29c高表达可抑制SAH后柔脑膜胶原合成,从而治疗柔脑膜纤维化。(本文来源于《山东大学学报(医学版)》期刊2015年04期）
康婕[7]（2015）在《Wnt信号通路对大鼠脑室出血后柔脑膜纤维化的影响》一文中研究指出目的:本课题研究Wnt信号通路对大鼠脑室出血后柔脑膜纤维化的影响。实验通过检测大鼠脑室出血后脑脊液中纤维化标志物PICP的表达变化,脑组织中Wnt信号通路(β-catenin,Wnt3a)的激活情况,探讨Wnt信号通路在大鼠脑室出血后柔脑膜纤维化中的作用,为临床上脑室出血后柔脑膜纤维化和慢性脑积水的治疗提供新的思路及方法。方法:1.运用脑立体定位仪,将大鼠自体尾静脉血注入大鼠侧脑室来建立大鼠脑室出血的动物模型。2.清洁级雄性SD大鼠75只,体重180g~200g之间,随机分为叁个组,脑室出血组(IVH组)(n=25),假手术组(n=25),正常对照组(n=25)。各组按断头处死的时间不同分别分为3d、6d、10d、14d、21d共5个亚组。IVH组采用二次注射法缓慢推注20μL抗凝自体尾静脉血至模型大鼠的侧脑室;假手术组只穿刺至侧脑室,不注射自体血液;正常对照组不作处理,正常饲养。3.在动物模型建立后第21d采用MASSON染色对柔脑膜纤维化的程度进行测量比较。在不同时间点采用放射免疫法检测各时间点大鼠脑脊液中PICP含量,采用免疫组化法检测各时间点大鼠大脑半球脑组织Wnt信号通路(β-catenin,Wnt3a)的激活情况,收集标本后进行数据的统计学分析。结果:1.MASSON染色显示IVH组大鼠的柔脑膜灰度值显着低于假手术组、正常对照组(P<0.01),厚度显着高于假手术组、正常对照组(P<0.01),柔脑膜的胶原纤维含量显着高于假手术组、正常对照组(P<0.01);假手术组、正常对照组之间各指标无显着性差异(P>0.05)。2.PICP浓度变化:假手术组、正常对照组的大鼠脑脊液中PICP浓度在各时间点无明显变化(P>0.05);假手术组、正常对照组大鼠脑脊液中PICP浓度之间无显着性组间差异(P>0.05)。IVH组大鼠脑脊液中PICP浓度水平显着高于假手术组和正常对照组(P<0.01)。3.Wnt3a蛋白测定:正常对照组、假手术组的大鼠脑组织中Wnt3a蛋白在各时间点无明显变化(P>0.05);正常对照组、假手术组大鼠脑组织中Wnt3a蛋白之间无显着性组间差异(P>0.05)。IVH组大鼠脑组织中Wnt3a蛋白表达水平显着高于假手术组和正常对照组(P<0.01)。4.β-catenin蛋白测定:正常对照组、假手术组的大鼠脑组织中β-catenin蛋白在各时间点无明显变化(P>0.05);正常对照组、假手术组大鼠脑组织中β-catenin蛋白之间无显着性组间差异(P>0.05)。IVH组大鼠脑组织中β-catenin蛋白表达水平显着高于假手术组和正常对照组(P<0.01)。5.IVH组大鼠的脑脊液中PICP的浓度和脑组织中Wnt3a表达变化呈正相关(R2=0.942,P<0.01)。脑脊液中PICP的浓度和脑组织中β-catenin表达变化呈正相关(R2=0.958,P<0.01)。脑组织中Wnt3a和β-catenin表达呈正相关(R2=0.905,P<0.01)。结论:1.应用脑立体定位仪,采用二次注血法,制作大鼠IVH模型,方法简单,操作性强,与人体IVH的病理生理变化特点相近,是较理想的IVH动物模型。2.IVH后的第2l天,柔脑膜发生明显的胶原增生,纤维化形成。柔脑膜的MASSON染色可作为柔脑膜纤维化的检测指标。3.IVH后,大鼠脑脊液中PICP浓度会显着升高,提示柔脑膜发生纤维化。柔脑膜纤维化的发生和累积可能是导致IVH后慢性脑积水形成的原因。脑脊液中PICP的浓度持续高表达与纤维化的严重程度相关。4.IVH后,脑组织中β-catenin和Wnt3a蛋白表达均增强,且与大鼠脑脊液中PICP浓度升高呈正相关,提示Wnt信号通路(β-catenin和Wnt3a)的激活在IVH后柔脑膜纤维化的发生发展及形成中可能发挥着重要作用。(本文来源于《四川医科大学》期刊2015-04-01）
孟桃[8]（2015）在《Wnt/β-catenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜纤维化中的作用》一文中研究指出目的:建立大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)模型,检测SAH后脑脊液(CSF)中PICP浓度的动态变化以及脑组织内Wnt3a、β-catenin蛋白的表达情况,探讨Wnt/β-catenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜纤维化中的作用,为通过抗纤维化途径来治疗SAH后慢性脑积水提供更多的理论依据。方法:1.采用“二次枕大池注血法”建立大鼠蛛网膜下腔出血模型。2.将75只健康雄性SD大鼠随机分为叁组:空白组(25只)、假手术组(25只)、模型组(25只)。各组按时间点分为术后3d、6d、10d、14d和21d,5个亚组,每个亚组5只大鼠。分别于术后相应时间点抽取各组大鼠脑脊液存放备检测,以及固定取脑,石蜡包埋切片。3.于术后1d、3d、6d、10d、14d、21d观察各组大鼠一般情况并进行行为学检查评分,评价大鼠SAH模型是否成功。4.将空白组、假手术组、模型组第21天的大鼠脑组织切片进行Masson染色,采用Motic image advances 3.2图像分析系统测量柔脑膜的平均厚度和平均灰度值,并进行定量分析。5.采用放射免疫法检测空白组、假手术组、模型组大鼠术后相应时间点脑脊液中PICP的浓度。6.免疫组织化学法检测空白组、假手术组、模型组大鼠术后相应时间点脑组织中Wnt3a、β-catenin蛋白的表达情况。结果:1.模型组大鼠精神萎靡,活动减少,食欲下降;在术后1 d和3d,模型组大鼠的行为学评分结果明显低于假手术组和空白组(P<0.01);而在6d、10 d、14 d、21d,各组大鼠的评分结果差异无统计学意义(P>0.05)。2.第21天大鼠柔脑膜Masson染色:模型组柔脑膜的平均灰度值显着低于假手术组和空白组,平均厚度显着高于假手术组和空白组(P<0.01);模型组柔脑膜平均胶原纤维含量显着高于假手术组和空白组(P<0.01)。假手术组与空白组柔脑膜的平均灰度值、平均厚度及平均胶原纤维含量差异无统计学意义(P>0.05)。3.PICP浓度变化:模型组各时间点CSF中的PICP浓度显着高于假手术组和空白组(P<0.01)。假手术组与空白组间差异无统计学意义(P>0.05)。4.Wnt3a蛋白测定:模型组在各时间点较同时间点假手术组和空白组Wnt3a的表达均有显着升高(P<0.01),并与PICP浓度变化呈显着正相关(P<0.01)。假手术组与空白组间差异无统计学意义(P>0.05)。5.β-catenin蛋白测定:模型组在各时间点较同时间点假手术组和空白组β-catenin的表达均有显着升高(P<0.01),并与PICP浓度、Wnt3a蛋白变化呈显着正相关(P<0.01)。假手术组与空白组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.采取自体血二次枕大池注血法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型,实验相对简单,可操作性强,与人体蛛网膜下腔出血的病理生理变化过程有一定相似性,是研究SAH后柔脑膜病理变化较为理想的一种动物模型。2.蛛网膜下腔出血后脑脊液中PICP浓度升高,提示柔脑膜发生纤维化。PICP浓度持续高表达与纤维化的严重程度相关。而柔脑膜纤维化的不断发生和累积可能是导致SAH后慢性脑积水形成的原因。3.Wnt3a、β-catenin蛋白在大鼠SAH模型中表达增加,且与脑脊液中PICP浓度的升高呈正相关,提示Wnt/β-catenin信号转导通路的激活在SAH后柔脑膜纤维化的发生发展及形成中可能发挥着重要作用。(本文来源于《四川医科大学》期刊2015-04-01）
王玉光,张超,沈文,郑晨,于鹏[9]（2015）在《椎板切除模型大鼠局部应用绿原酸对硬膜外纤维化及硬脑膜粘连的影响》一文中研究指出背景:椎板切除减压能起到有效的脊髓神经减压作用,但该操作也会发生硬膜外纤维增生并突入椎管,致医源性椎管狭窄,发生持续或复发的腰腿疼痛。绿原酸是金银花的有效药理成分之一,主要有抗炎等作用。目的:观察局部应用绿原酸对椎板切除模型大鼠硬膜外纤维化及硬脑膜粘连的影响。方法:选用72只健康成年Wistar大白鼠,制备椎板切除模型,随机分成3组(n=24)。绿原酸组皮肤缝合前椎板切除区域给绿原酸溶液2 m L/只;生理盐水组给予等量的生理盐水;空白对照组术后不做任何处理。各组大鼠均于造模后4周被处死,进行实验评估,包括大体评价、组织学分析、羟脯氨酸含量测定及白细胞介素6、转化生长因子β1的表达情况。结果与结论:3组大白鼠均进入结果分析,解剖并取样。绿原酸组硬膜外胶原纤维增生较少,外观较为正常;生理盐水组和空白对照组硬膜外胶原纤维明显增多,外观可见明显纤维瘢痕组织。组织学评价显示,绿原酸组的组织染色切片中成纤维细胞的密度明显比其他两组的成纤维细胞密度低。绿原酸组硬膜外纤维瘢痕的羟脯氨酸含量显着低于生理盐水组和空白对照组(P<0.01)。通过RT-PCR方法测得绿原酸组白细胞介素6和转化生长因子β1的表达低于另外两组。提示椎板切除模型大鼠局部应用绿原酸可以抑制成纤维细胞增殖,同时可以降低白细胞介素6和转化生长因子β1的表达,防止硬膜外瘢痕粘连。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年05期）
叶瑞豪[10]（2014）在《吡非尼酮对大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜纤维化的影响》一文中研究指出目的：蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)是由于各种原因造成颅内出血，血液流入蛛网膜下腔形成的。按其发生机制不同可分为：外伤性SAH、自发性SAH、继发性SAH。外伤性SAH是颅脑外伤导致的；自发性SAH是指无明显诱因SAH，主要颅内动静脉畸形或动脉瘤破裂出血造成；继发性SAH是由于脑室内或脑实质内出血弥散到蛛网膜下腔形成的。SAH后急性期神经系统并发症主要有脑血管痉挛造成的缺血性脑损伤、出血部位发生再出血、急性脑积水等。慢性脑积水是其远期主要并发症之一，严重影响患者的预后、生活质量。SAH作为神经内外科常见危重急症，目前对急性期并发症研究较多，对脑积水的研究相对较少，对脑积水发生的具体机制尚未明确。多数学者认为：SAH后急性脑积水的发生是由于血凝块堵塞脑脊液循环通路造成的梗阻性脑积水，起病比较急,主要表现为神情淡漠、反应迟钝、原有症状加重、重症病人出现昏迷、意识障碍。SAH后慢性脑积水的发生主要原因在于出血造成的应激、炎症反应刺激蛛网膜、软脑膜、蛛网膜小梁等柔脑膜结构发生纤维化病变，使局部结构发生纤维化粘连，造成脑脊液的吸收减少，导致交通性脑积水；堵塞脑脊液循环通路造成脑脊液循环受阻，形成梗阻性脑积水。吡非尼酮(Pirfenidone, PFD)是一种小分子化合物，化学式：C12Hl1NO，PFD分子能够通过细胞膜，无需受体。口服给药后经胃肠道吸收，迅速在体内各组织中广泛分布，可透过血脑屏障。大量实验证实PFD在抗纤维化治疗方面的疗效显着且不良反应少。主要应用于特异性肺纤维化、肾脏、肝脏、心肌组织、多发硬化症和神经纤维瘤等抗纤维化疾病的治疗研究。利用PFD预防及治疗SAH后的柔脑膜纤维化、减低SAH后慢性脑积水的发生率的研究尚未见报道。本研究拟观察PFD与大鼠SAH后脑脊液中强致纤维化因子之一转化生长因子-β1（transforming growth factor beta1，TGF-β1）的关系，以及其对柔脑膜纤维化的影响。方法:采用清洁级SD大鼠80只，雌雄不限，体重250±10g，随机分为正常对照组、假手术组和模型组；模型组又分为干预组和对照组。采用血管内穿刺法建立SAH动物模型，干预组给予PFD100mg/kg灌胃给药，对照组给予安慰剂灌胃，连续14天，分别在3、6、10、14、21天自枕大池采集脑脊液标本，检测各组脑脊液中TGF-β1的浓度；第21天将试验动物灌注取脑，经MASSON染色处理后，用病理图文分析系统图像处理软件Image-Pro Plus6.0分析图像，测量柔脑膜的厚度和灰度值，以100×厚度/灰度值作为胶原纤维含量的指标，所得数据均采用SPSS13.0软件进行统计学分析。观察其对柔脑膜纤维化的程度的影响。结果:1各组大鼠一般情况的观察比较空白组大鼠进食好，精神好，被毛有光泽，活动灵活，未见明显异常状态，随着饲养时间的延长，体型渐长，体重不断增加。假手术组大鼠麻醉清醒后表现为竖毛、精神萎靡、饮食摄水减少、活动减少，于术后第1日恢复正常，进食增多，精神状态佳，被毛光泽，活动灵活，无异常状态出现，随着饲养时间的延长，体型渐长，体重不断增加。模型组大鼠麻醉清醒后表现为竖毛、精神萎靡、嗜睡，定向力差、于术后1周内均精神萎靡、饮食摄水减少，活动减少，于术后1周后渐恢复，精神较前好转，饮食摄水增加，但与空白组及假手术组相比活动减少，反应较迟钝。随着饲养时间延长，体型有所增长。2模型制作观察及神经行为评分模型制作24小时后，空白组和假手术组灌注取脑后，蛛网膜下腔未见血液成分，颅底未见血凝块。模型组灌注取脑后大脑腹侧面可见血凝块存在，主要位于前颅窝及颅底动脉环周围，包绕脑底部主要血管，并且穿刺侧出血量相对较多，颅底相对应位置可见血凝块。模型制作24小时候，参照Bederson方法进行神经行为功能缺损评分。将评分2分以上为纳入模型成功标准。结果提示:空白组和假手术组没有功能缺损，模型组神经功能缺损评分平均为2.50±0.56分，与空白对照组进行比较，评分有统计学意义。3转化因子-β1及柔脑膜纤维化影响对照组大鼠脑脊液中TGF-β1的浓度出现2次升高，与空白组比较差异有显着性（P<0.05）。干预组脑脊液中TGF-β1的浓度也出现2次升高，但最高值明显低于对照组（P<0.05）。空白组、假手术组无明显变化。MASSON染色显示对照组与干预组较空白组、假手术组柔脑膜增厚且灰度值明显减低（P<0.05），其中干预组较对照组柔脑膜纤维化明显减低（P<0.05）。空白组与假手术组柔脑膜无明显纤维化。结论:1SAH发生后脑脊液中TGF-β1浓度明显升高，并呈双时相性。2SAH21天后可出现柔脑膜纤维化现象。3SAH发生后应用PFD干预可降低脑脊液中的TGF-β1的浓度，特别是能够明显减低第二时相的升高程度，能够明显减低柔脑膜的纤维化程度。(本文来源于《河北医科大学》期刊2014-03-01）
脑膜纤维化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:脑积水(external hydrocephalus,EH)是临床常见颅脑疾病,严重影响到患者生活质量,成为沉重的家庭与社会负担。脑积水一旦形成,致残率很高。目前脑积水的临床治疗手段大多仅能缓解症状,并不能彻底治愈,因此,脑积水的治疗是神经病学科的一大难题。各种类型脑积水的共同原因是蛛网膜下腔纤维增生,粘连,软脑膜纤维化是其主要病理改变,主要表现为脑膜间皮细胞(meningeal mesothelial cells,MMCs)大量增殖以及细胞外基质的堆积。原代脑膜间皮细胞分离困难,体外培养要求条件较高,传代难度大,传多代后细胞贴壁率大幅下降,这些缺陷给体外研究带来困难,成为阻碍脑膜间皮细胞相关研究的重要技术难题。因此,体外培养脑膜间皮细胞并建立永生化细胞系可为脑膜相关疾病的研究提供方便可靠的细胞模型,对于了解脑膜间皮细胞在脑膜纤维化中的作用和功能意义重大。同时,有关脑膜纤维化的研究大多局限于影像学和组织学层面,对其分子水平的发病机制研究甚少。引起器官纤维化的细胞因子众多,近年来研究较广泛、深入的是TGF-β1(transforming growth factor-beta 1,转化生长因子-β1)。有研究结果证实,TGF-β1可引起脑膜间皮细胞CTGF(connective growth factor,结缔组织生长因子)的m RNA和蛋白表达上调,促使脑膜间皮细胞增殖并合成多种胶原等细胞外基质,导致脑膜纤维化的形成,因此阻断TGF-β1通路对抑制脑膜纤维化具有重要意义。但因TGF-β1还具有免疫调节和抑制炎性反应等重要生理功能,使直接阻断TGF-β1的治疗缺乏临床可行性,故应找寻TGF-β1下游新的治疗靶点以单纯阻断TGF-β1促纤维化的过程。p38 MAPK(p38 mitogen-activated protein kinase,p38丝裂原活化蛋白激酶)和ERK/MAPK通路(mitogen-activated protein kinases,MAPKs,丝裂原活化蛋白激酶;extracellular signal-regulated kinase,ERK,细胞外信号调节激酶)是信号转导的两条重要通路,有学者证明在多种细胞,如肺成纤维细胞,肾系膜细胞及肾成纤维细胞中p38信号通路和ERK/MAPK都可介导TGF-β1诱发的纤维化,但是两者是否参与TGF-β1对脑膜间皮细胞纤维化的诱导并不清楚。本课题尝试建立大鼠脑膜间皮细胞永生化细胞系并以外源TGF-β1为刺激因子建立体外脑膜纤维化的细胞模型,从基因转录和蛋白合成两个方面探讨p38MAPK和ERK/MAPK信号通路在TGF-β1诱导脑膜间皮细胞纤维化的具体作用,试图为脑积水的防治寻到有效的干预位点。目的:1.建立大鼠脑膜间皮细胞永生化细胞系。2.以TGF-β1为刺激因子建立体外脑膜纤维化的细胞模型,观察RMMCs中有无参与组织纤维化的p38 MAPK及ERK/MAPK的表达,并应用p38MAPK特异性抑制剂SB203580、ERK/MAPK的抑制剂U0126处理细胞,观察CTGF的表达,探讨脑膜纤维化的发生机制,为今后防治脑膜纤维化寻求有效的靶点。方法:1.大鼠原代脑膜间皮细胞的分离和培养:用胰酶消化组织块法收集大鼠原代脑膜间皮细胞;2.构建表达SV40LT的慢病毒载体并转染大鼠脑膜间皮细胞;3.应用扫描电镜、细胞免疫荧光化学、RT-PCR等技术从细胞形态、特异性标志物、目的基因的表达等方面对野生及转染SV40LT后的大鼠脑膜间皮细胞进行鉴定。4.用不同浓度的TGF-β1分别孵育培养RMMCs 24 h,采用q PCR测定CTGF的相对表达量,采用Western blotting测定p-p38MAPK、p-ERK1/2的信号强度;预先用不同浓度的SB203580或U0126处理RMMCs,观察TGF-β1诱导的CTGF表达是否受影响。采用q PCR测定CTGF m RNA的相对表达量,采用Western blotting测定CTGF蛋白质表达水平。结果:1.体外成功培养大鼠原代脑膜间皮细胞。分离培养的RMMCs在倒置显微镜下观察:细胞为多边形,汇合时呈铺路石样排列;扫描电镜下可见细胞表面有大量密集突起的绒毛;免疫细胞化学鉴定结果显示RMMCs抗波形蛋白抗原阳性,抗细胞角蛋白抗原阳性,抗第VIII因子相关抗原阴性,流式细胞术检测培养细胞的纯度达90%以上。2.构建含SV40LT基因的慢病毒表达载体,并成功转染RMMCs。转染后挑选单克隆RMMCs鉴定,扫描电镜下可见细胞表面有大量密集突起的绒毛;免疫细胞化学鉴定结果显示抗波形蛋白抗原阳性,抗细胞角蛋白抗原阳性,抗第VIII因子相关抗原阴性;RT-PCR鉴定目的基因SV40LT成功整合入RMMCs基因组。3.TGF-β1可诱导体外RMMC细胞发生纤维化,表现为纤维化标志物CTGF表达水平的显着增加;4.TGF-β1以浓度依赖的方式诱导脑膜间皮细胞中p38 MAPK通路的活化,SB203580可阻断TGF-β1对该信号通路的活化,并强烈抑制纤维化标记物CTGF的表达。SB203580预处理细胞后,再应用TGF-β1刺激,CTGF的诱导表达几乎被完全抑制。5.TGF-β1以浓度依赖的方式诱导脑膜间皮细胞中ERK/MAPK通路的活化。U0126可阻断TGF-β1对该信号通路的活化,但纤维化标志物CTGF的诱导表达不受影响。结论:1.经SV40LT的慢病毒载体成功建立RMMCs永生化细胞系。2.TGF-β1可通过激活p38 MAPK通路促进体外培养的脑膜间皮细胞CTGF表达。TGF-β1活化p38 MAPK通路促进CTGF表达是其致脑膜纤维化的重要机制之一。3.TGF-β1可以诱导细胞中ERK/MAPK通路的活化,但ERK/MAPK通路不参与TGF-β1致脑膜纤维化的过程。4.TGF-β1可通过多种途径促进体外培养的脑膜间皮细胞CTGF表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脑膜纤维化论文参考文献
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