导读:本文包含了甾体皂苷元论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:知母,甾体皂苷元,转录组,关键酶基因
甾体皂苷元论文文献综述
朱敏[1]（2019）在《知母甾体皂苷元生物合成关键酶基因克隆及生化研究》一文中研究指出目的:知母,百合科知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)的干燥根茎,是一种传统中药,其主要的药理活性成分是知母皂苷及其苷元,约占知母干燥根茎的6%,种类较多(近50多种)、含量丰富。目前知母皂苷BII对于阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)以及改善学习记忆能力具有明显的效果,已经有了深入的研究,是一个有潜力的抗AD的药物。然而,其具体的生物合成途径及关键酶基因尚不清楚。知母甾体皂苷依靠植化分离不仅成本较高,而且受制于天然药用资源,提取物的质量难以控制。因此本研究挖掘知母皂苷生物合成途径上的关键酶基因,2,3-氧化鲨烯环化酶(2,3-oxidosqualene cyclase,OSC)、甾醇侧链甲基转移酶1(Sterol methyl transferase 1,SMT1)和甾醇侧链还原酶2(Sterol side chain reductase enzyme 2,SSR2),对其进行异源表达和生化功能验证,为知母皂苷合成途径的研究奠定基础。方法:(1)对知母根茎和地上部分进行转录组测序,收集整理番茄中报道的甾体生物碱合成途径中所有的基因序列以及其他主要含有甾体皂苷物种中的转录组数据,通过本地Blast,找到与知母皂苷生物合成所有相关的Unigenes。然后通过在线工具,进行基因开放阅读框分析,找出全长和非全长的序列。对知母皂苷母核合成有关的Unigenes通过qRT-PCR进行表达部位分析,结合候选基因的表达特征与知母主要成分的含量分布特点,进一步预测知母甾体皂苷合成途径的候选基因。(2)克隆知母AaOSC、AaSMT1和AaSSR2候选基因,将AaOSC连接至酵母表达载体pESC-URA和pESC-HIS以及烟草表达载体pEAQ-HT-DEST1,AaSMT1和AaSSR2连接至酵母表达载体pESC-HIS,进行异源表达,利用GC/MS对其表达产物进行分析。(3)将AaOSC和AaSMT1与其他物种中的同源基因利用MEGA软件进行蛋白质序列比对,绘制环阿屯醇合酶(cycloartenol synthase,CAS)与甾醇侧链还原酶(Sterol methyl transferase,SMT)的系统进化树,分析其与其他物种的进化关系。(4)利用合成生物学多片段酵母染色体同源重组技术,将2,3-氧化鲨烯合成途径中的关键酶基因以及知母AaOSCR12整合至酵母基因组,进行稳定表达,构建产2,3-氧化鲨烯工程菌和产环阿屯醇酵母工程菌。结果:(1)知母根茎和地上部分转录组测序,找到了与知母皂苷生物合成所有相关的Unigenes共40条,其中与知母皂苷母核合成有关的Unigenes有18条。(2)结合基因差异表达水平与知母皂苷、甾醇代谢含量分析,显示知母皂苷在根中大量积累,与其合成相关的基因也在根中特异性表达;根茎中甾体皂苷的含量远远高于甾醇的含量,说明代谢流在胆固醇-甾体皂苷这条途径上流量很大。(3)AaOSCR12的产物为环阿屯醇,其另一个产物还需进一步分离纯化鉴定结构,确定AaOSCR12为知母环阿屯醇合酶,而AaOSCL6和AaOSCL10无催化活性。AaSMT1催化环阿屯醇产生24-亚甲基环木菠萝烷醇,具有甾醇侧链转移酶1活性。(4)构建了高产2,3-氧化鲨烯酵母工程菌Y2-SE-10和高产环阿屯醇酵母工程菌Y3-AaOSCR12,Y2-SE-10工程菌可以为2,3-氧化鲨烯环化酶的功能验证提供高含量的底物,同时也可以作为优势底盘菌进行下一步基因整合;Y3-AaOSCR12工程菌可以将环阿屯醇的产量提高7.4倍,从而为AaSMT1和AaSSR2基因的功能提供底物支持。结论:本论文挖掘了知母皂苷生物合成途径上的关键酶基因,并克隆鉴定了3条AaOSC基因、1条AaSMT1基因和2条AaSSR2基因,异源表达验证了AaOSCR12为知母环阿屯醇合酶。AaSMT1催化环阿屯醇产生24-亚甲基环木菠萝烷醇,具有甾醇侧链转移酶1活性,此外,还构建了产2,3-氧化鲨烯工程菌Y2-SE-10和产环阿屯醇工程菌Y3-AaOSCR12,为知母皂苷生物合成途径的解析、环阿屯醇合酶催化机制的研究奠定了基础。(本文来源于《广东药科大学》期刊2019-05-15）
田伟生[2]（2019）在《天然资源型化合物甾体皂苷元的化学研究》一文中研究指出甾体皂苷元是一类重要的天然资源型化合物,它们已经被作为合成甾体药物的基本原料之一。为了能够实现高效、洁净并以"原子经济性"方式利用这类化合物资源,作者课题组系统地研究了甾体皂苷元的氧化降解反应。通过研究提供了用30%双氧水作为氧化试剂分别氧化伪甾体皂苷元和甾体甾苷元成为相应的孕烯酮醇、孕甾叁醇、甾体-22-酸内酯以及系列含甲基侧链的双官能团手性合成试剂的实用方法和技术,进一步还研究了甾体皂苷元氧化降解产物在甾体药物、天然甾体活性分子和非甾体功能手性分子合成中的应用。作者课题组研究了甾体皂苷元螺环缩酮的溴代开环、胺代开环、内酯化溴代等反应,为利用甾体皂苷元完整骨架高效合成一些具有胆固醇基本结构的中药活性成分和具有重要生物活性的天然甾体化合物提供了新的思路和方法。(本文来源于《中国药科大学学报》期刊2019年01期）
汪朋[3]（2015）在《盾叶薯蓣中甾体皂苷的提取和薯蓣皂苷元绿色制备工艺研究》一文中研究指出盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis C.H.Wright)为薯蓣科薯蓣属植物,广泛分布于我国陕西、湖南、湖北等地,其植物根茎中的甾体皂苷是主要活性物质。甾体皂苷具有治疗心血管疾病、增强免疫、抗菌、抗癌等多种功效。盾叶薯蓣中甾体皂苷结构上的母核主要为薯蓣皂苷元,为甾体激素类药物的合成前体,是一种非常重要的化学合成原料。传统提取甾体总皂苷的方法是加热搅拌提取,存在溶剂消耗大、效率低等缺陷。传统的薯蓣皂苷元的制备方法中使用大量盐酸、硫酸水解皂苷,环境污染极其严重。为了解决以上两个突出问题,本课题根据甾体皂苷和薯蓣皂苷元的性质,首先设计简单且高效的甾体皂苷提取工艺;在此基础上,使用“绿色溶剂”酸性离子液体代替传统的无机酸去催化水解甾体皂苷制备薯蓣皂苷元;并进一步对甾体皂苷活性进行分析评价。主要结果如下:1.甾体皂苷提取工艺的设计与优化针对传统提取工艺弱点,设计叁种提取工艺,并对其进行了优化。采用超声微波提取工艺提取盾叶薯蓣中的总甾体皂苷,最优提取条件为70%乙醇作为提取溶剂,料液比为1:15 g mL-1,微波功率为500 W,提取时间为420 s。在该提取条件下,总甾体皂苷能够被提取出来,得率以薯蓣皂苷元计为1.35%。采用超声微波辅助离子液体提取工艺提取盾叶薯蓣中的总甾体皂苷,最优提取条件为0.5 mol L-1的[EMIm]BF4作为提取溶剂,料液比为1:15 g m L-1,微波功率为500 W,提取时间为480 s。在该提取条件下,甾体皂苷得率以薯蓣皂苷元计为1.02%。采用酶法前处理-超声微波提取工艺提取盾叶薯蓣中的总甾体皂苷,单因素实验结果为使用纤维素酶和果胶酶1:1比例的复合酶进行酶解前处理,酶解缓冲液pH确定为5.0,加酶量为底物原料重量的0.8%。提取过程中,70%乙醇作为提取溶剂,料液比为1:15,微波功率为500 W,提取时间为300 s。此后采用响应面优化方法对酶法前处理-超声微波提取工艺进行优化,成功建立Box-Behnken响应面模型,模型优化后条件为pH 5.2,乙醇浓度为73.7%,微波功率为547.9 W,模型预测最优值以薯蓣皂苷元计为1.46%,验证实验结果为1.41%,验证结果与预测结果基本保持一致。2.薯蓣皂苷元新型制备工艺的设计、优化和水解机理研究酸性离子液体是一种具有广阔前景的酸性催化剂,其化学性质稳定、可回收循环使用、催化效率高等特性,在催化水解甾体皂苷制备薯蓣皂苷元方面表现得十分突出。使用普通酸性离子液体[EMIm]HSO4催化皂苷水解制备薯蓣皂苷元,并采用响应面优化水解条件。优化后的反应条件为[EMIm]HSO4浓度8.5 mol L-1,反应温度100℃,料液比1:22g m L-1,反应时间为7.3 h。在该条件下,水解0.3 g皂苷得到薯蓣皂苷元量为29.88±0.45mg。功能化酸性离子液体[BHSO3MIm]HSO4催化皂苷水解为薯蓣皂苷元的反应条件为浓度5 mol L-1,反应温度100℃,料液比为1:15 g m L-1,反应时间为5 h。在该条件下,水解0.3 g皂苷得到薯蓣皂苷元量为30.68±0.36 mg。在此基础上,设计了微波辅助功能化酸性离子[BHSO3MIm]HSO4催化水解皂苷为薯蓣皂苷元,反应条件为浓度4 mol L-1,温度100℃,料液比为1:15 g mL-1,反应时间为20 min。在该条件下,水解0.3 g皂苷得到薯蓣皂苷元量为29.97±0.51 mg。此后对[EMIm]HSO4与[BHSO3MIm]HSO4进行比较。同时对水解过程中甾体皂苷成分变化的研究表明甾体皂苷在离子液体催化水解过程是一个逐级的、动态变化的过程:C3位糖链上的糖被离子液体逐个水解直至生成薯蓣皂苷元。3.固定化酸性离子液体的制备和应用采用溶胶-凝胶法制备固定化酸性离子液体。以正硅酸乙酯为硅源,以功能化酸性离子液体1-丁基磺酸-3-甲基咪唑硫酸氢盐([BHSO3MIm]HSO4)为原料,并采用红外光谱和扫描电镜进行表征,结果表明固定化离子液体制备成功。研究了固定化离子液体催化水解甾体皂苷制备薯蓣皂苷元的最佳工艺,其工艺为0.3 g皂苷用9 mL 70%乙醇水溶液充分溶解以后,加入固定化酸性离子液体,95℃水解反应4 h。反应结束,冷却,加入20倍体积的蒸馏水。过滤,取滤渣烘干至恒重。再用石油醚萃取滤渣中的薯蓣皂苷元,回收石油醚后得到薯蓣皂苷元。结果表明制备的固定化离子液体单次催化水解效果和多次使用后水解效果均比未固定离子液体好。4.薯蓣皂苷元产品表征和副产物薯蓣淀粉的提取重结晶得到薯蓣皂苷元产品。对薯蓣皂苷元进行外貌分析、扫描电镜分析、红外光谱分析、高效液相色谱色谱分析,其结果说明该产品为薯蓣皂苷元白色晶体,纯度为92.3%。设计了二种同时提取皂苷、分离淀粉工艺。其路线一为:原料为干盾叶薯蓣,则先浸泡24 h,使其充分吸水,“转化”为鲜盾叶薯蓣。然后将盾叶薯蓣带水磨浆3 min,用滤布过滤,每次用200 m L水洗纤维素2次,合并滤液和水洗液,静置分层。分离下层,水洗、烘干至恒重后得淀粉,记录淀粉重量,其淀粉得率为36%-40%。其路线二为:干燥盾叶薯蓣粉末先提取皂苷,过滤,将提取料渣与其质量1.5%的纤维素酶均匀混合后,在pH为5.0缓冲液体系中,50℃反应2 h,离心、洗涤、烘干至恒重,即可得粗淀粉,粗淀粉得率约为40%。5.抑制细菌生物膜活性和抗肺癌细胞活性的研究研究盾叶薯蓣中典型甾体皂苷单体对铜绿假单胞菌生物膜抑制作用。薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷随着浓度的增大,抑制能力也在增强,呈现明显的剂量依赖性。当皂苷浓度在4 mg m L-1水平时,其生物膜抑制率均大于80%。研究薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷对非小细胞肺癌细胞A549的抑制活性,这叁种典型的甾体皂苷对肺癌细胞有明显的抑制作用,均呈现出较为明显的时间和剂量依赖性,且在10μg m L-1浓度水平上抑制能力超过阳性对照品10-羟基喜树碱。(本文来源于《江南大学》期刊2015-12-01）
方惠娟,李清,关潇滢,钱忠直,王铁杰[4]（2012）在《HPLC-ELSD法测定蒺藜粗皂苷中3种甾体皂苷元》一文中研究指出目的同时测定蒺藜粗皂苷中海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元的量。方法采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(86∶14),漂移管温度100℃,载气体积流量2.5 L/min。结果海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元分别在114.1～1 141.0μg/mL(R2=0.999 2),16.88～168.80μg/mL(R2=0.999 4),78.60～786.00μg/mL(R2=0.999 3)呈良好线性关系;蒺藜粗皂苷中海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元的平均回收率分别为99.7%(RSD为1.6%)、99.3%(RSD为1.4%)、99.4%(RSD为1.1%)。结论该方法简便、准确、快速,且专属性良好,可用于蒺藜粗皂苷的质量评价。(本文来源于《中草药》期刊2012年12期）
陈战国,闻化,周利燕,王英杰,李文丽[5]（2011）在《利用薯蓣皂苷元完整骨架合成新的含磺胺氮丙啶结构的甾体皂苷元》一文中研究指出报道一种方便的利用薯蓣皂苷元完整骨架合成新的含磺胺氮丙啶结构甾体皂苷元新方法.利用氨卤加成反应,以对甲苯磺酰胺和N-溴代丁二酰亚胺作为氮源和卤素源,铝粉作为催化剂,在薯蓣皂苷元的5,6位双健上分别引入溴和磺酰氨基.在室温下,用无水K2CO3作催化剂,以小分子酰胺作为助催化剂合成出含磺胺氮丙啶结构的甾体皂苷元(m.p.149～150℃,收率为99.8%).目标化合物结构经1H NMR、13C NMR和元素分析得到确证.(本文来源于《陕西师范大学学报(自然科学版)》期刊2011年02期）
肖草茂,席贞,肖云川,冉坚,余敏[6]（2010）在《一类新型高芳香胆甾烷型甾体皂苷元的NMR特征》一文中研究指出目的研究一类新型的高芳香胆甾烷型甾体皂苷元的NMR特征。方法采用1D-和2D-NMR技术测定高芳香胆甾烷皂苷元的NMR数据,并结合文献数据进行分析。结果对该类型化合物苷元的全部NMR信号进行了明确归属。结论高芳香胆甾烷型甾体皂苷元的NMR特征明确,可为该类型的化合物结构鉴定提供重要参考。(本文来源于《华西药学杂志》期刊2010年06期）
程水连,雷泽,胡大伟,蒋明忠,祝正辉[7]（2010）在《(异)螺甾烷型甾体皂苷元的选择性开环反应研究》一文中研究指出利用一种全新的甾体皂苷元E/F全开环体系,即室温下,加入催化量的无水AlCl3,以CH3COCl作开环试剂、CH2Cl2作溶剂的开环体系,以良好的收率及选择性实现了甾体工业重要基础原料薯蓣皂苷元、剑麻皂苷元的E/F全开环,提出了可能的开环反应机理.开环产物具有胆甾烷的完整碳骨架并在C16,C22,C26位引入了具有良好衍生能力的多个官能团,该产物为一系列高活性甾体化合物的简捷合成提供了原料.(本文来源于《云南大学学报(自然科学版)》期刊2010年05期）
王浩[8]（2009）在《蒺藜甾体皂苷元分离鉴定及含量测定研究》一文中研究指出蒺藜为蒺藜科植物蒺藜Tribulus terrestris L.的干燥成熟果实,又名刺蒺藜、硬蒺藜,是我国常用中药。具有平肝解郁,活血祛风,明目,止痒功效。用于头痛眩晕,胸胁胀痛,乳闭乳痈,目赤翳障,风疹瘙痒。本课题在综述国内外对蒺藜的化学成分和药理研究进展的基础上,采用化学手段以及多种分离方法,包括大孔树脂、硅胶柱色谱等手段,对蒺藜甾体皂苷元类成分进行分离、纯化,得到了四个甾体皂苷元。采用APCI-MS、IR、~1H NMR、~(13)C NMR等波谱技术鉴定其结构,分别为替告皂苷元(Ⅰ)、海柯皂苷元(Ⅱ)、吉托皂苷元(Ⅲ)和曼诺皂苷元(Ⅳ),纯度分别为94.32%、98.74%、100%和98.10%。其中化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ纯度达到98%以上,符合对照品要求。采用HPLC-ELSD法建立了蒺藜总皂苷中海柯皂苷元、吉托皂苷元、曼诺皂苷元的含量测定方法,流动相为甲醇-水系统,进行梯度洗脱;流速为1 mL/min;柱温25℃;ELSD漂移管温度80.5℃,载气流速2.2 L/min,进行叁个对照品含量测定的方法学考察。海柯皂苷元、吉托皂苷元、曼诺皂苷元分别在1.5μg-13.5μg、1.2μg-10.8μg和1.18μg-10.62μg范围内线性关系良好,其回归方程为:Y=1.5071X+5.6588,r=0.9999;Y=1.2869X+5.9101,r=0.9999;Y=1.3949X+5.7294,r=0.9997。结果证明该方法准确、可靠。本课题通过分离鉴定蒺藜甾体皂苷元类成分,从中确定了海柯皂苷元、吉托皂苷元、曼诺皂苷元叁种化合物作为对照品,并建立了海柯皂苷元、吉托皂苷元和曼诺皂苷元含量测定方法,为蒺藜果皂苷原料药的质量控制提供了可靠的方法,为蒺藜的科学合理使用提供了科学依据。(本文来源于《延边大学》期刊2009-05-10）
齐珊珊,董悦生,刘琳,修志龙[9]（2008）在《米曲霉转化盾叶薯蓣中的甾体皂苷生成薯蓣皂苷元的工艺优化》一文中研究指出目的优化米曲霉直接转化盾叶薯蓣药材生成薯蓣皂苷元的工艺条件。方法从培养基缓冲盐、药材载量、微生物接种量、温度等几个方面对转化过程进行了优化。结果选用pH5.0或6.0的1/15mol/L的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液,药材载量为3.33%,米曲霉接种量8%,37℃培养84h后提温至50℃再继续转化8h,能够达到最大的转化率。薯蓣皂苷元的最大得率为17.06mg/g药材。结论米曲霉能够将盾叶薯蓣中的甾体皂苷转化为薯蓣皂苷元,且转化后总的甾体皂苷有大量释放,可达到转化前的1.73倍。(本文来源于《2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集》期刊2008-10-01）
吕立华,周效思,彭艳梅[10]（2007）在《纤维素酶法提取知母甾体总皂苷元工艺研究》一文中研究指出目的:优化知母甾体总皂苷的提取工艺。方法:以甾体菝葜皂苷元的提取率为指标,应用L9(34)正交试验设计优化了知母中甾体皂苷的纤维素酶法提取工艺。结果:影响酶法提取甾体皂苷的主次因素为:酶用量>提取温度>固液比>水解时间。纤维素酶处理能显着提高甾体皂苷的提取率,加酶后甾体菝葜皂苷元提取率的平均值为84.6%,而未加酶的结果则为58.1%。结论:酶法提取新工艺能显着提高知母甾体皂苷的提取率。(本文来源于《中医药导报》期刊2007年10期）
甾体皂苷元论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
甾体皂苷元是一类重要的天然资源型化合物,它们已经被作为合成甾体药物的基本原料之一。为了能够实现高效、洁净并以"原子经济性"方式利用这类化合物资源,作者课题组系统地研究了甾体皂苷元的氧化降解反应。通过研究提供了用30%双氧水作为氧化试剂分别氧化伪甾体皂苷元和甾体甾苷元成为相应的孕烯酮醇、孕甾叁醇、甾体-22-酸内酯以及系列含甲基侧链的双官能团手性合成试剂的实用方法和技术,进一步还研究了甾体皂苷元氧化降解产物在甾体药物、天然甾体活性分子和非甾体功能手性分子合成中的应用。作者课题组研究了甾体皂苷元螺环缩酮的溴代开环、胺代开环、内酯化溴代等反应,为利用甾体皂苷元完整骨架高效合成一些具有胆固醇基本结构的中药活性成分和具有重要生物活性的天然甾体化合物提供了新的思路和方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
甾体皂苷元论文参考文献
[1].朱敏.知母甾体皂苷元生物合成关键酶基因克隆及生化研究[D].广东药科大学.2019
[2].田伟生.天然资源型化合物甾体皂苷元的化学研究[J].中国药科大学学报.2019
[3].汪朋.盾叶薯蓣中甾体皂苷的提取和薯蓣皂苷元绿色制备工艺研究[D].江南大学.2015
[4].方惠娟,李清,关潇滢,钱忠直,王铁杰.HPLC-ELSD法测定蒺藜粗皂苷中3种甾体皂苷元[J].中草药.2012
[5].陈战国,闻化,周利燕,王英杰,李文丽.利用薯蓣皂苷元完整骨架合成新的含磺胺氮丙啶结构的甾体皂苷元[J].陕西师范大学学报(自然科学版).2011
[6].肖草茂,席贞,肖云川,冉坚,余敏.一类新型高芳香胆甾烷型甾体皂苷元的NMR特征[J].华西药学杂志.2010
[7].程水连,雷泽,胡大伟,蒋明忠,祝正辉.(异)螺甾烷型甾体皂苷元的选择性开环反应研究[J].云南大学学报(自然科学版).2010
[8].王浩.蒺藜甾体皂苷元分离鉴定及含量测定研究[D].延边大学.2009
[9].齐珊珊,董悦生,刘琳,修志龙.米曲霉转化盾叶薯蓣中的甾体皂苷生成薯蓣皂苷元的工艺优化[C].2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集.2008
[10].吕立华,周效思,彭艳梅.纤维素酶法提取知母甾体总皂苷元工艺研究[J].中医药导报.2007