导读:本文包含了蒿鳖养阴软坚方论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肝纤维化,蒿鳖养阴软坚方,TGF-β1,collagenⅠ
蒿鳖养阴软坚方论文文献综述
唐诗慧,张丽,方步武[1]（2018）在《蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用》一文中研究指出目的:研究蒿鳖养阴软坚方在体外对LX-2细胞的影响,从而探讨蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用。方法:体外培养人肝星状细胞LX-2,实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组和蒿鳖养阴软坚方低、中、高浓度给药组。MTT法检测LX-2细胞增殖情况;比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;酶消化法检测细胞上清羟脯氨酸(Hyp)的含量;Western blot法检测collagenⅠ以及α-SMA蛋白表达量。结果:TGF-β1作用于LX-2能够明显促进细胞的增殖,collagen Ⅰ、α-SMA的表达量显着升高。蒿鳖养阴软坚方能抑制LX-2细胞增殖并且能够降低collagenⅠ和α-SMA的表达。结论:蒿鳖养阴软坚方能够显着抑制LX-2增殖,下调collagenⅠ和α-SMA的表达,降低Hyp生成,从而发挥抗肝纤维化的作用。(本文来源于《天津医科大学学报》期刊2018年05期）
唐诗慧[2]（2018）在《蒿鳖养阴软坚方正丁醇提取部分影响Nrf2/HO-1信号通路抑制肝纤维发生的作用》一文中研究指出肝纤维化是细胞外基质过度沉积的动态进行性过程,是各种慢性肝病的共同病理变化,其发病率在全世界范围内呈现出不断上升的趋势~([1])。肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖并活化,导致细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成与降解失衡并最终导致肝纤维化~([2])。本实验采用的蒿鳖养阴软坚方是由青蒿、鳖甲、知母、白花蛇舌草、虎杖、丹参等九味中药组成。前期研究表明,蒿鳖养阴软坚方对多种慢性肝病有良效;蒿鳖养阴软坚方粗提物对多种原因所致的实验性肝纤维化有确切的防治作用;能升高血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织核因子NF-E2相关因子(nuclear fac-tor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)表达,也能升高伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导肝纤维化小鼠肝组织血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)表达。然而,尚不清楚蒿鳖养阴软坚方的何种极性部分的作用较强,也不清楚该方影响HO-1表达的作用环节。目的本研究旨在探讨蒿鳖养阴软坚方的不同极性部分对肝纤维发生的影响,初步揭示该方的正丁醇萃取部分影响Nrf2/HO-1信号通路的作用环节抑制肝纤维发生的作用机理,为临床上应用蒿鳖养阴软坚方治疗肝纤维化提供理论依据。方法:(1)MTT法测定蒿鳖养阴软坚方对LX-2细胞增殖的影响,根据实验结果选取对LX-2细胞增殖的抑制作用最强的一种萃取方案。比色法检测LX-2细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;酶消化法检测细胞培养液中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)的含量。Western blot法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原(TypeⅠcollagen,collagenⅠ)水平。(2)体外培养LX-2细胞,实验分为空白对照组(细胞对照组)、模型对照组(模型组,TGF-β1刺激组)、蒿鳖养阴软坚方中剂量组(1 mg/mL)、蒿鳖养阴软坚方高剂量组(2 mg/mL)、全反式维甲酸组(all-trans-retinoicacid,ATRA)(ATRA是Nrf2由胞浆入核的抑制剂)和ATRA+蒿鳖养阴软坚方高剂量组,提取总蛋白和核蛋白,western blot法测定总蛋白中Nrf2、HO-1、α-SMA和collagenⅠ蛋白的表达,测定核蛋白中Nrf2的表达。结果:(1)与细胞对照组比较,TGF-β1作用于LX-2细胞24 h后明显刺激细胞增殖(P<0.05)。与TGF-β1刺激组比较,各不同萃取部分的蒿鳖养阴软坚方给药组均能显着抑制LX-2细胞的增殖,且浓度为1 mg/mL的蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取物对LX-2增殖的抑制作用最为明显,优于叁氯甲烷、乙酸乙酯及水萃取部分的作用。(2)与细胞对照组比较,TGF-β1能显着刺激LX-2细胞分泌Hyp(P<0.05)。各不同浓度的蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取物预处理细胞24 h后再给予TGF-β1处理24 h后,Hyp含量显着降低,且随着药物浓度的增高,Hyp含量降低越显着。各浓度的蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取物给药组细胞培养液中的LDH活性变化无显着性意义(P>0.05),提示供试药对LX-2各指标的影响并非细胞毒作用所致。(3)TGF-β1刺激组LX-2细胞内collagenⅠ和α-SMA蛋白水平均显着上升(P<0.05)。各不同浓度的蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取物预处理LX-2细胞后再用TGF-β1刺激,能够显着下调α-SMA和collagenⅠ的表达,表明蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分能通过抑制肝星状细胞的活化和细胞外基质的产生而发挥抗肝纤维化的作用。(4)与TGF-β1刺激比较,蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分中、高剂量组均能显着上调LX-2细胞内Nrf2和HO-1的表达(P<0.05)。ATRA组能抑制Nrf2总蛋白以及核内Nrf2蛋白水平。与蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分高剂量组比较,ATRA+蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分高剂量组能反转蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分对Nrf2蛋白水平的升高作用;抑制Nrf2转位入核后也能反转蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分对α-SMA和collagenⅠ蛋白表达水平的降低作用。结论:(1)蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分抑制TGF-β1刺激LX-2细胞增殖的作用最强,同时能有效地抑制LX-2产生和分泌胶原蛋白,减轻LX-2活化,从而发挥抑制肝纤维发生的作用。(2)蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分通过促进Nrf2转位入核,因而上调Nrf2/HO-1信号通路,产生抗氧化应激作用,继而降低LX-2增殖与活化,减少胶原蛋白的产生及分泌,最终抑制了肝纤维发生。(本文来源于《天津医科大学》期刊2018-05-01）
卢娜,方步武[3]（2018）在《蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路影响》一文中研究指出目的:探讨蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A(Con A)诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路的影响。方法:Balb/c小鼠随机分为正常、模型、秋水仙碱和蒿鳖养阴软坚方低、中、高剂量(1.16 g/kg、3.36 g/kg、11.58 g/kg)组。除正常组外,剩余各组均尾静脉注射1.5 mg/m L Con A,每周1次,持续10周。取小鼠肝脏作病理切片,观察肝脏的病理变化,检测肝组织羟脯氨酸浓度,免疫组化法检测肝组织Nrf2、HO-1蛋白的表达情况。结果:与模型组比较,蒿鳖养阴软坚方各剂量组能不同程度地减轻肝组织的炎症反应和降低肝组织羟脯氨酸的浓度,显着减轻肝纤维化程度(P<0.05);随着蒿鳖养阴软坚方浓度增加,Nrf2和HO-1的阳性表达逐渐增强。结论:蒿鳖养阴软坚方对Nrf2/HO-1信号通路具有激活作用,且该作用可能为其抗肝纤维化机制之一。(本文来源于《天津医科大学学报》期刊2018年02期）
刘悦,李杉杉,唐诗慧,方步武[4]（2018）在《蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路抑制肝纤维化发生》一文中研究指出目的:探讨蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路对四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的抑制作用。方法:选用健康Wistar大鼠作为研究对象,将大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和秋水仙碱组。除正常组大鼠外,其余大鼠均给予自制高脂饲料饲养,每周两次皮下注射40%CC14花生油混合溶液,隔日灌胃给予30%乙醇,各给药组每日灌胃给药的同时给予正常组和模型组以等容积的蒸馏水,直至造模时间(共6周)结束后,乌拉坦麻醉大鼠并收集肝组织标本,比色法检测肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的分布情况,Western blot法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平。结果:与正常组相比,模型组Hyp含量明显升高(P<0.05);各给药组的Hyp含量显着低于模型组,且肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平显着升高(P<0.05)。结论:蒿鳖养阴软坚方可以通过激活Nrf2/NQO1通路,上调Nrf2和NQO1的表达,降低肝组织中Hyp的含量,从而发挥抑制由四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的作用。(本文来源于《天津医科大学学报》期刊2018年01期）
李杉杉,刘悦,唐诗慧,方步武[5]（2018）在《蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制》一文中研究指出目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响,探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:健康Wistar大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60%提取方案组(0.09 mg·kg~(-1)·d~(-1))、先水后醇95%提取方案低、高剂量组(2.59 g.kg~(-1)·d~(-1)、8.2 g·kg~(-1)·d~(-1))、水提醇沉低、高剂量组(2.59 g·kg~(-1)·d~(-1)、8.2 g·kg~(-1)·d~(-1))及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只大鼠。酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1次,造模10周后处死大鼠,留取标本。酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量;Western blotting检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达;光镜观察肝组织免疫组化染色结果。结果:(1)肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高(P<0.01);与模型组比较,先水后醇60%提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低(P<0.05)。(2)肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高(P<0.01)。(3)肝组织免疫组化染色结果:模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达,各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核。结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路,增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达,降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用。(本文来源于《天津医科大学学报》期刊2018年01期）
卢娜[6]（2017）在《蒿鳖养阴软坚方通过影响Nrf2/HO-1信号通路抑制肝纤维发生》一文中研究指出在肝纤维化形成的进程中,常伴有纤维化和炎性浸润的发生,而不同病因导致肝纤维化发生的中心环节是肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的活化,HSCs的活化受各种因素的影响,其中氧化应激起着至关重要的作用。活性氧(reactive oxygen species,ROS)介导了氧化应激,生理状态下,ROS的合成水平与机体的清除水平处于动态平衡。当有外源性物质刺激肝脏时,ROS的生成与其清除失去平衡,则会导致细胞内大分子物质的氧化损伤,肝脏功能受到破坏。核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)是调节内源性抗氧化防御系统的关键蛋白,在氧化应激的刺激下,核转录因子Nrf2向细胞核转移并与抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)结合,激活Nrf2转录并调节下游抗氧化酶HO-1基因的转录。诱导Nrf2活化的药物有许多种,本文采用的药物为蒿鳖养阴软坚方(HBYY)。目的本研究旨在探讨蒿鳖养阴软坚方对H_2O_2诱导肝损伤的影响和ConA诱导小鼠肝纤维化的作用,初步揭示蒿鳖养阴软坚方可通过Nrf2/HO-1信号通路影响细胞内Nrf2从细胞浆转移至细胞核内发挥抗炎、抗氧化应激的作用机制,为蒿鳖养阴软坚方应用于肝纤维化的临床防治提供了依据。方法1.以人源肝星状细胞株LX-2为研究对象,分别采用浓度为10μM/L、50μM/L、100μM/L、200μM/L、500μM/L过氧化氢作用于LX-2,作用时间为24h。利用噻唑蓝(MTT)法测定LX-2的增殖率,从而确定H_2O_2活化LX-2的最适作用时间和作用浓度。2.以人源肝星状细胞株LX-2为研究对象,设立细胞对照组,H_2O_2模型组,蒿鳖养阴软坚方预给药组(2、4、6 mg/mL HBYY+100μM/L H_2O_2)。MTT比色法测定LX-2增殖抑制率。比色法检测各组LX-2细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western Blot法检测各组中TNF-α、Nrf2、HO-1蛋白的表达,采用酶消化法测定各组细胞上清中羟脯氨酸的浓度。3.建立伴刀豆球蛋白A尾静脉注射诱导小鼠肝纤维化模型,分组为正常组、模型组、蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量组、秋水仙碱组。免疫组化染色检测各组Nrf2、HO-1蛋白的表达情况;HE染色检测蒿鳖养阴软坚方对ConA诱导肝纤维化小鼠肝组织形态的影响;天狼猩红染色检测蒿鳖养阴软坚方对ConA诱导肝纤维化小鼠肝胶原纤维的影响;放射性免疫法检测小鼠血清中HA和PCⅢ的浓度,酶消化法检测各组肝组织中羟脯氨酸的浓度,Western Blot法检测各组Nrf2、HO-1、TNF-α蛋白的表达情况。结果1.蒿鳖养阴软坚方抑制了LX-2细胞的增殖及作用:与细胞对照组比较得出,蒿鳖养阴软坚方可显着抑制LX-2细胞的增殖,且其抑制作用呈浓度和时间依赖性,差异具有统计学意义;蒿鳖养阴软坚方可上调细胞内Nrf2、HO-1蛋白的表达,下调TNF-α蛋白的表达。蒿鳖养阴软坚方组LDH活性与对照组比较无显着性差异;蒿鳖养阴软坚方各剂量作用于LX-2细胞24h后,细胞上清液中Hyp的浓度明显减少,且Hyp浓度随着蒿鳖养阴软坚方剂量的增大而逐渐下降。2.伴刀豆球蛋白A尾静脉注射诱导小鼠肝纤维化模型中,免疫组化结果显示,与模型组相比,蒿鳖养阴软坚方各剂量组,Nrf2、HO-1蛋白的表达均升高,其中低剂量最为显着。HE染色和天狼腥红染色结果显示,蒿鳖养阴软坚方能够抑制ConA对肝脏结构所造成的损伤,减轻肝纤维化的程度。酶消化法检测各组肝组织中羟脯氨酸的浓度,结果显示蒿鳖养阴软坚方组中羟脯氨酸的浓度低于模型组。放射性免疫法检测HA和PCⅢ浓度的结果显示,与模型组比,蒿鳖养阴软坚方能够显着降低血清中HA和PCⅢ的浓度。结论1.蒿鳖养阴软坚方可激活Nrf2/HO-1信号通路,促进Nrf2的转录作用。2.蒿鳖养阴软坚方一方面呈剂量和时间依赖性的抑制LX-2细胞增殖,另一方面上调了Nrf2、HO-1蛋白表达,下调TNF-α蛋白表达,从而诱导LX-2细胞凋亡。3.蒿鳖养阴软坚方通过抑制LX-2细胞增殖并诱导细胞凋亡,抑制了细胞外基质的生成,发挥了抗纤维化的作用。4.蒿鳖养阴软坚方能够显着降低ConA诱导小鼠肝纤维化模型中血清HA和PCⅢ的浓度。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
刘悦[7]（2017）在《蒿鳖养阴软坚方影响Nrf2/NQO1信号通路而抑制四氯化碳诱导肝纤维化的作用》一文中研究指出肝纤维化(Hepatics fibrosis,HF),作为所有慢性肝病的共同病理改变,是由各种慢性致病因素如(胆汁淤积、化学毒物或某些代谢性疾病)等,导致以胶原为主要成分的细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)合成增多,但降解减少,合成和降解的失衡,ECM大量异常沉积于肝内而引起的。研究表明肝纤维化病理改变是可逆的,但如果不加以治疗控制,则会发展成不可逆的肝硬化甚至肝癌。肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC),作为ECM的主要来源,其活化增殖便成为肝纤维化发生发展的中心环节。本实验选用CCl_4(Carbon tetrachloride)作为刺激剂活化HSC,蒿鳖养阴软坚方作为治疗药物。研究目的通过探讨蒿鳖养阴软坚方缓解CCl_4肝纤维化引起氧化损伤程度,初步揭示Nrf2/NQO1通路在蒿鳖养阴软坚方抑制肝纤维化发生中的作用。研究方法1、确定采用体外培养人源LX-2细胞株作为研究对象进行体外培养,按照空白对照组、模型对照组、蒿鳖养阴软坚方组,蒿鳖养阴软坚方组+CCl_4进行分组,运用MTT法测定LX-2增殖率;运用比色法测定细胞上清乳酸脱氢酶(Actic dehydrogenase,LDH)活性和羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量。2、确定采用体外培养人源LX-2细胞株作为研究对象进行体外培养,按照空白对照组、模型对照组、CCl_4+蒿鳖养阴软坚方组、CCl_4+双香豆素+全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)组+蒿鳖养阴软坚方组、CCl_4+ATRA+蒿鳖养阴软坚方组、CCl_4+双香豆素+蒿鳖养阴软坚方以及CCl_4+莱菔硫烷(Sulforaphane)+蒿鳖养阴软坚方组进行分组,运用MTT法测定LX-2增殖率;运用酶消化法测定细胞上清Hyp含量,运用Western Blot法检测每组α-SMA、Nrf2以及NQO1的表达水平。3、在体内,选取SPF级健康Wistar大鼠作为研究对象,建立CCl_4复合因素所致的大鼠肝纤维化模型,分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量治疗组,造模时间6周时间完成后,所有大鼠均再继续饲养一周后开始采集样本,每只大鼠均收集一部分肝组织储存在脱水液中待运用比色法测定各肝组织中Hyp含量,提取肝组织蛋白,一部分用于蛋白定量,另外一部分煮沸变性,用于Western blot法检测肝组织Nrf2和NQO1的表达水平,免疫组织化学的方法测定各组大鼠肝内NQO1和Nrf2的表达水平及分布情况。研究结果1、与空白对照组进行比较,模型组和CCl_4+蒿鳖养阴软坚方组LX-2增殖率显着增高,差异具有统计学意义(P<0.05),Hyp含量也明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);CCl_4+蒿鳖养阴软坚方组与模型对照组比较,LX-2抑制率明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);Hyp含量显着降低,差异具有统计学意义(P<0.05);但各组之间LDH活性差异不具有统计学意义(P>0.05)。2、与空白对照组进行对比而言,其余五组LX-2增殖率均显着增高,差异具有统计学意义(P<0.05),Hyp含量也明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。CCl_4+Sulforaphane组位居其次,该组与CCl_4+蒿鳖养阴软坚方组相比,LX-2细胞存活率明显降低(P<0.05),与CCl_4+ATRA+蒿鳖养阴软坚方组和CCl_4+双香豆素+蒿鳖养阴软坚方组以及CCl_4+双香豆素+ATRA+蒿鳖养阴软坚方组相比,LX-2抑制率明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),Hyp含量显着降低,差异具有统计学意义(P<0.05),α-SMA表达水平显着降低,差异具有统计学意义(P<0.05),Nrf2和NQO1的表达水平呈现出了大幅度的上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、与正常对照组进行对比而言,模型对照组的Hyp含量明显升高,Nrf2和NQO1的表达水平明显降低,在取组织的过程中,模型组大鼠的腹水与肝纤维化病变均非常严重,说明此次实验建模成功;与模型对照组相比,蒿鳖养阴软坚方叁个治疗剂量组的Hyp含量是明显降低的,Nrf2和NQO1的表达水平明显升高,组织肝纤维化病变程度也明显缓解,由此说明,蒿鳖养阴软坚方对于治疗CCl_4复合因素诱导形成的大鼠肝纤维化病变有显着疗效。结论1、结合体内和体外实验测定结果显示蒿鳖养阴软坚方均可以通过下调α-SMA表达水平的同时上调Nrf2和NQO1的表达水平,有效地抑制CCl_4诱导的LX-2细胞活化增殖,减少Hyp含量。2、蒿鳖养阴软坚方可以通过影响Nrf2/NQO1通路从而上调Nrf2表达水平,进而上调其下游II相解毒酶NQO1的表达水平,有效的抑制LX-2细胞活化增殖,进而控制肝纤维化发生发展。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
李杉杉[8]（2017）在《蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号通路抑制酒精性肝纤维化作用》一文中研究指出目的结合体内实验和体外实验探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对酒精性肝纤维化的作用机制,并探讨其通过激活Nrf2通路诱导下游抗氧化反应蛋白γ-GCS的表达,而抑制酒精性肝纤维化,进一步推动鳖养阴软坚方成功应用于临床,为众多酒精性肝纤维化患者提供更为健康、有效、副作用小的防治药物。本课题组结合体内、外两大实验部分,根据不同提取方案的复方给药后,分析大鼠肝组织中胶原蛋白含量,观察乙醛刺激后的LX-2细胞生长、增殖的情况,研究酒精性肝纤维化大鼠肝组织中以及乙醛刺激后的LX-2细胞中Nrf2/γ-GCS通路中主要蛋白Nrf2、γ-GCS的表达。方法1、从军事科学院购买健康Wistar大鼠体重在200~240g的共80只,雌性和雄性各占一半。每日灌胃相应浓度酒精并辅助大鼠皮下注射40%CCL4-花生油以及添加高脂饲料进行酒精性肝纤维化模型造模。将大鼠按体重随机区组分组法分为完全水提低剂量组(2.59g.kg-1.d-1)、完全水提高剂量组(8.2g.kg-1.d-1)、先水后醇95%低剂量组(2.59g.kg-1.d-1)、先水后醇95%高剂量组(8.2g.kg-1.d-1)、水提醇沉低剂量组(2.59g.kg-1.d-1)、水提醇沉高剂量组(8.2g.kg-1.d-1)、粉末组(0.09mg.kg-1.d-1)、阳性药对照组为复方鳖甲软肝片组(0.09mg.kg-1.d-1)、模型对照组(30%乙醇灌胃,每天一次)、正常对照组(正常组蒸馏水1.2ml.g-1.d-1)。方法步骤:模型组大鼠早晨用30%乙醇进行灌胃,间隔6h后灌蒸馏水;各给药组早晨用30%乙醇灌胃,下午按照各自实验分组分别给对应剂量的复方。正常组大鼠全天均灌胃蒸馏水。造模10周后处死大鼠,留取标本。光镜观察肝组织免疫组化Nrf2通路中相关抗氧化蛋白的表达,;盐酸水解法检测实验各组大鼠肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量并以胶原蛋白含量表示;Western Blot方法检测Nrf2通路中Nrf2蛋白和下游抗氧化应激蛋白γ-GCS的表达。2、本实验用不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方和一定浓度的乙醛处理体外培养的LX-2细胞株,并同时以乙醛刺激活化的和正常培养的LX-2细胞组为对照,采用MTT法探讨两种复方提取方案对乙醛活化的LX-2细胞的作用情况以及两种复方提取方案与Nrf2通路阻断剂ATRA合用后乙醛活化的LX-2细胞的增殖情况。采用谷胱甘肽(GSH)试剂盒测定各实验分组内培养细胞中的GSH含量。结果1、肝组织免疫组化结果:模型组和用药组Nrf2和γ-GCS均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核,而且给药组Nrf2和和γ-GCS的表达量随剂量增加,即高剂量组下游蛋白的表达量高于低剂量组,给药组下游蛋白表达量明显高于模型组(P<0.01)。2、肝组织胶原蛋白含量结果:粉末组和先水后醇低、高剂量组作用效果相当(P>0.05);但是二者与完全水提低、高剂量组以及水提醇沉低、高剂量组之间作用效果差异明显,即前者作用效果明显优于后者(P<0.05);每一种提取方案内部低、高剂量的肝组织胶原蛋白含量也不同,但实际的抑制肝纤维化效果相当(P>0.05)。3、肝组织Western-blot结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织中Nrf2、γ-GCS蛋白显着增高(P<0.01);与模型组比较,粉末提取方案组以及先水后醇95%高剂量组大鼠肝组织中Nrf2、γ-GCS蛋白表达显着增高(P<0.01);先水后醇95%高剂量组大鼠肝组织中Nrf2、γ-GCS蛋白表达与粉末组比较无明显差异(P>0.05)。4、LX-2细胞前期MTT法筛选提取方案结果:粉末组和先水后醇组作用效果相差不大(P>0.05);但是结合细胞内Hyp含量发现二者抑制肝纤维化效果明显优于完全水提组以及水提醇沉组(P<0.05)。5、LX-2细胞后期MTT法结果:单用乙醛的对照组的确可以加快LX-2细胞的增殖速度,同时将不同提取方案的复方按照实验设计给药后可以明显降低LX-2细胞在乙醛刺激后的增殖速度(P<0.05)。确定先水后醇95%方案、粉末提取方案、阳性药物莱菔硫烷(SFN)以及Nrf通路特异性阻断剂ATRA各自与LX-2细胞最佳作用浓度和作用时间以及各组治疗药物与ATRA合用后,活化的LX-2细胞抑制率降低(P<0.05)。6、LX-2细胞各实验分组内培养细胞中的GSH含量结果:先水后醇95%提取方案、粉末提取方案和ATRA联合处理后可降低细胞内的GSH(P<0.05);当用BSO抑制细胞内的GSH合成后,先水后醇95%提取方案和ATRA联合作用可使细胞内的GSH含量锐减(P<0.05)。结论1、体内实验和体外实验均造模成功。2、粉末组提取方案和先水后醇95%提取方案对体内实验模型以及体外实验模型有治疗作用。3、粉末组提取方案和先水后醇95%提取方案的复方对于大鼠酒精性肝纤维化治疗涉及Nrf2/γ-GCS通路的参与,可能通过上调Nrf2/γ-GCS通路,有效提高抗氧化蛋白γ-GCS活性,从而抑制大鼠酒精性肝纤维化。4、两种提取方案的复方抑制乙醛活化的LX-2细胞增殖涉及Nrf2/γ-GCS通路的参与,可能通过上调Nrf2/γ-GCS通路,有效提高抗氧化蛋白γ-GCS活性,增加细胞内GSH含量,从而抑制活化的LX-2细胞增殖。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
率红莉,方步武,邢伟,刘洁莹[9]（2013）在《蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳复合因素所致肝纤维化的预防作用》一文中研究指出目的:探讨蒿鳖养阴软坚方对CCl4复合因素所致大鼠肝纤维化的预防作用及可能的作用机制。方法:将大鼠随机分为正常对照组,模型组,蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量组(8.20,2.59,0.82 g.kg-1),复方鳖甲软肝片组(0.54 g.kg-1),秋水仙碱组(1×10-4g.kg-1)。第1次sc CCl45 mL.kg-1,从第2次开始每隔3 d sc 40%CCl4花生油3 mL.kg-1至第12次;模型组和治疗组隔日ig 30%乙醇(1 mL/只),各治疗组每日给药1次,正常组和模型组均给予相应体积的蒸馏水,每周6d(停药1 d),共6周。观测肝组织形态和胶原蛋白,测定血清肝功能丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST);放免法测定血清透明质酸(HA)、IV型胶原(IV-C)、III型前胶原(PCIII),层黏连蛋白(LN)水平;紫外-可见分光光度法测定血清丙二醛(MDA)水平;检测肝组织中羟脯氨酸,胶原蛋白及白蛋白含量。结果:模型组大鼠肝组织内肝细胞广泛变性及坏死,大量炎性细胞浸润,类假小叶形成,大量胶原纤维形成;蒿鳖养阴软坚方高剂量组的肝脏病理变化程度较模型组明显减轻且无类假小叶形成;模型组的ALT,AST,HA及PCIII含量均高于正常对照组(P<0.01,P<0.05);各蒿鳖养阴软坚方给药组ALT,AST,HA及PCIII高剂量组显着低于模型组(P<0.05);MDA及胶原蛋白的含量均低于模型组(P<0.01),各蒿鳖养阴软坚方给药组白蛋白均高于模型组(P<0.01)。结论:蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳复合因素诱导的大鼠肝纤维化有预防作用;其作用机制可能与抗脂质过氧化损伤,抗炎,抑制胶原蛋白的合成等有关。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2013年16期）
寇咏梅,刘洁莹,方步武[10]（2013）在《蒿鳖养阴软坚方抗小鼠血吸虫病肝纤维化及其机制的研究》一文中研究指出目的明确蒿鳖养阴软坚方对血吸虫病肝纤维化的治疗作用,探讨肝星状细胞凋亡与抗血吸虫病肝纤维化的关系。方法血吸虫尾蚴25条/只经腹壁皮肤感染小鼠,12周之后建立小鼠血吸虫病肝纤维化模型。将全部感染小鼠随机分为蒿鳖养阴软坚方(8.20、2.59、0.82g/kg)治疗组、阳性药物(复方鳖甲软肝片组0.54g/kg、秋水仙碱组0.1g/kg)组、模型对照组(短模组、长模组)和正常对照组。蒿鳖养阴软坚方组ig蒿鳖养阴软坚方干粉状提取物混悬液;阳性药物对照组ig相应的阳性药物;模型组ig生理盐水,1次/d,共12周。光镜观察肝细胞病理变化;盐酸水解法测定肝细胞羟脯氨酸含量;免疫组化法测定α-SMA表达和ISOL技术测定细胞凋亡情况。结果蒿鳖养阴软坚方高、中剂量组胶原蛋白含量均明显降低(P<0.05)。模型组HSC细胞α-SMA大量表达;而蒿鳖养阴软坚方组肝星状细胞(HSC)细胞α-SMA表达较模型组明显减少(P<0.01)。蒿鳖养阴软坚方中剂量组比模型组肝星状细胞数量有显着差异(P<0.05),与正常组肝星状细胞凋亡差异无显着性(P>0.05)。结论蒿鳖养阴软坚方对小鼠血吸虫病肝纤维化有治疗作用。抑制HSC的活化,并诱导其发生凋亡,是蒿鳖养阴软坚方抗血吸虫病肝纤维化的机制之一。(本文来源于《现代药物与临床》期刊2013年03期）
蒿鳖养阴软坚方论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
肝纤维化是细胞外基质过度沉积的动态进行性过程,是各种慢性肝病的共同病理变化,其发病率在全世界范围内呈现出不断上升的趋势~([1])。肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖并活化,导致细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成与降解失衡并最终导致肝纤维化~([2])。本实验采用的蒿鳖养阴软坚方是由青蒿、鳖甲、知母、白花蛇舌草、虎杖、丹参等九味中药组成。前期研究表明,蒿鳖养阴软坚方对多种慢性肝病有良效;蒿鳖养阴软坚方粗提物对多种原因所致的实验性肝纤维化有确切的防治作用;能升高血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织核因子NF-E2相关因子(nuclear fac-tor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)表达,也能升高伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导肝纤维化小鼠肝组织血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)表达。然而,尚不清楚蒿鳖养阴软坚方的何种极性部分的作用较强,也不清楚该方影响HO-1表达的作用环节。目的本研究旨在探讨蒿鳖养阴软坚方的不同极性部分对肝纤维发生的影响,初步揭示该方的正丁醇萃取部分影响Nrf2/HO-1信号通路的作用环节抑制肝纤维发生的作用机理,为临床上应用蒿鳖养阴软坚方治疗肝纤维化提供理论依据。方法:(1)MTT法测定蒿鳖养阴软坚方对LX-2细胞增殖的影响,根据实验结果选取对LX-2细胞增殖的抑制作用最强的一种萃取方案。比色法检测LX-2细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;酶消化法检测细胞培养液中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)的含量。Western blot法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原(TypeⅠcollagen,collagenⅠ)水平。(2)体外培养LX-2细胞,实验分为空白对照组(细胞对照组)、模型对照组(模型组,TGF-β1刺激组)、蒿鳖养阴软坚方中剂量组(1 mg/mL)、蒿鳖养阴软坚方高剂量组(2 mg/mL)、全反式维甲酸组(all-trans-retinoicacid,ATRA)(ATRA是Nrf2由胞浆入核的抑制剂)和ATRA+蒿鳖养阴软坚方高剂量组,提取总蛋白和核蛋白,western blot法测定总蛋白中Nrf2、HO-1、α-SMA和collagenⅠ蛋白的表达,测定核蛋白中Nrf2的表达。结果:(1)与细胞对照组比较,TGF-β1作用于LX-2细胞24 h后明显刺激细胞增殖(P<0.05)。与TGF-β1刺激组比较,各不同萃取部分的蒿鳖养阴软坚方给药组均能显着抑制LX-2细胞的增殖,且浓度为1 mg/mL的蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取物对LX-2增殖的抑制作用最为明显,优于叁氯甲烷、乙酸乙酯及水萃取部分的作用。(2)与细胞对照组比较,TGF-β1能显着刺激LX-2细胞分泌Hyp(P<0.05)。各不同浓度的蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取物预处理细胞24 h后再给予TGF-β1处理24 h后,Hyp含量显着降低,且随着药物浓度的增高,Hyp含量降低越显着。各浓度的蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取物给药组细胞培养液中的LDH活性变化无显着性意义(P>0.05),提示供试药对LX-2各指标的影响并非细胞毒作用所致。(3)TGF-β1刺激组LX-2细胞内collagenⅠ和α-SMA蛋白水平均显着上升(P<0.05)。各不同浓度的蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取物预处理LX-2细胞后再用TGF-β1刺激,能够显着下调α-SMA和collagenⅠ的表达,表明蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分能通过抑制肝星状细胞的活化和细胞外基质的产生而发挥抗肝纤维化的作用。(4)与TGF-β1刺激比较,蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分中、高剂量组均能显着上调LX-2细胞内Nrf2和HO-1的表达(P<0.05)。ATRA组能抑制Nrf2总蛋白以及核内Nrf2蛋白水平。与蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分高剂量组比较,ATRA+蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分高剂量组能反转蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分对Nrf2蛋白水平的升高作用;抑制Nrf2转位入核后也能反转蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分对α-SMA和collagenⅠ蛋白表达水平的降低作用。结论:(1)蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分抑制TGF-β1刺激LX-2细胞增殖的作用最强,同时能有效地抑制LX-2产生和分泌胶原蛋白,减轻LX-2活化,从而发挥抑制肝纤维发生的作用。(2)蒿鳖养阴软坚方正丁醇萃取部分通过促进Nrf2转位入核,因而上调Nrf2/HO-1信号通路,产生抗氧化应激作用,继而降低LX-2增殖与活化,减少胶原蛋白的产生及分泌,最终抑制了肝纤维发生。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蒿鳖养阴软坚方论文参考文献
[1].唐诗慧,张丽,方步武.蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用[J].天津医科大学学报.2018
[2].唐诗慧.蒿鳖养阴软坚方正丁醇提取部分影响Nrf2/HO-1信号通路抑制肝纤维发生的作用[D].天津医科大学.2018
[3].卢娜,方步武.蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路影响[J].天津医科大学学报.2018
[4].刘悦,李杉杉,唐诗慧,方步武.蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路抑制肝纤维化发生[J].天津医科大学学报.2018
[5].李杉杉,刘悦,唐诗慧,方步武.蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制[J].天津医科大学学报.2018
[6].卢娜.蒿鳖养阴软坚方通过影响Nrf2/HO-1信号通路抑制肝纤维发生[D].天津医科大学.2017
[7].刘悦.蒿鳖养阴软坚方影响Nrf2/NQO1信号通路而抑制四氯化碳诱导肝纤维化的作用[D].天津医科大学.2017
[8].李杉杉.蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号通路抑制酒精性肝纤维化作用[D].天津医科大学.2017
[9].率红莉,方步武,邢伟,刘洁莹.蒿鳖养阴软坚方对四氯化碳复合因素所致肝纤维化的预防作用[J].中国实验方剂学杂志.2013
[10].寇咏梅,刘洁莹,方步武.蒿鳖养阴软坚方抗小鼠血吸虫病肝纤维化及其机制的研究[J].现代药物与临床.2013