作者耿超,赵红梅,周丹娜,蔡行,王双双（2019）在《日本乙型脑炎病毒NS5rdrp蛋白的真核表达及鉴定》一文中研究指出：为了探究日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机理和研制以JEV复制复合体为靶标的药物,试验以GenBank中收录的JEV HW1株基因序列为模板,设计针对NS5rdrp的特异性引物,提取JEV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板使用PCR方法克隆得到NS5rdrp基因片段;利用T4DNA连接酶构建重组质粒pcDNA3.1-NS5rdrp,并对产物测序;提取去除内毒素的重组质粒,用转染试剂X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent转染BHK21细胞,转染24 h后观察结果;最后利用Western-blot技术检测NS5rarp蛋白的表达情况。结果表明:PCR扩增得到大小约为920 bp的NS5rdrp基因片段;测序结果经NCBI上BLAST比对分析,克隆得到的NS5rdrp基因与HW1株的同源性为100%;转染时细胞的最佳密度区间为70%～80%,转染试剂与转染质粒的比例为3∶1;经过Western-blot检测,重组质粒在细胞内正常表达,NS5rdrp蛋白的分子质量约为37 ku。说明试验通过真核表达成功获得NS5rdrp蛋白。
wei le tan jiu ri ben yi xing nao yan bing du (Japanese encephalitis virus,JEV)de fu zhi ji li he yan zhi yi JEVfu zhi fu ge ti wei ba biao de yao wu ,shi yan yi GenBankzhong shou lu de JEV HW1zhu ji yin xu lie wei mo ban ,she ji zhen dui NS5rdrpde te yi xing yin wu ,di qu JEV RNA,fan zhuai lu de dao cDNA,yi ji wei mo ban shi yong PCRfang fa ke long de dao NS5rdrpji yin pian duan ;li yong T4DNAlian jie mei gou jian chong zu zhi li pcDNA3.1-NS5rdrp,bing dui chan wu ce xu ;di qu qu chu nei du su de chong zu zhi li ,yong zhuai ran shi ji X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagentzhuai ran BHK21xi bao ,zhuai ran 24 hhou guan cha jie guo ;zui hou li yong Western-blotji shu jian ce NS5rarpdan bai de biao da qing kuang 。jie guo biao ming :PCRkuo zeng de dao da xiao yao wei 920 bpde NS5rdrpji yin pian duan ;ce xu jie guo jing NCBIshang BLASTbi dui fen xi ,ke long de dao de NS5rdrpji yin yu HW1zhu de tong yuan xing wei 100%;zhuai ran shi xi bao de zui jia mi du ou jian wei 70%～80%,zhuai ran shi ji yu zhuai ran zhi li de bi li wei 3∶1;jing guo Western-blotjian ce ,chong zu zhi li zai xi bao nei zheng chang biao da ,NS5rdrpdan bai de fen zi zhi liang yao wei 37 ku。shui ming shi yan tong guo zhen he biao da cheng gong huo de NS5rdrpdan bai 。
论文作者分别是来自黑龙江畜牧兽医的耿超,赵红梅,周丹娜,蔡行,王双双，发表于刊物黑龙江畜牧兽医2019年15期论文，是一篇关于日本乙型脑炎病毒论文,蛋白论文,真核表达论文,聚合酶链式反应论文,细胞论文,免疫印迹分析论文,黑龙江畜牧兽医2019年15期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自黑龙江畜牧兽医2019年15期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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